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(無題) 削除/引用 No.12467-6 - 2024/07/28 (日) 07:59:25 - G25 メタノール感受性の抗原はよくあって、組成にメタノールを含む固定液ばかりでなく、他のアルコール、アセトンなど脂溶性の成分を含む固定液、市販ホルマリンに安定剤(重合防止剤)として添加されているメタノール(ものによっては10%くらい含むものもあるらしい)で、染まらなくなることがあります。 多くは膜タンパク質で、脂溶性成分によって膜が溶けて、膜タンパク質が流出するためと言われています。

(無題) 削除/引用 No.12467-5 - 2024/07/27 (土) 10:43:15 - toto この問題はちょっと調べると出てくると思いますが、メタノール固定は大変弱い固定で膜に穴を開けるので、細胞質成分はかなり流出します。逆にそれを利用して、細胞質にも沢山発現していて、一部が膜に結合してることを示すためによくつかわれます。この目的ではPFA固定の実験と併用して、PFAでは細胞質に多くあるけれども、メタノール固定では膜にあるのがよく見える、という示し方をします。 なお４％PFAでも室温10分はかなり弱い固定で、タンパクはがちがちに架橋されてるわけではありません。が、そのあとで界面活性剤で穴を開けても漏れないくらいには大体なります。

(無題) 削除/引用 No.12467-4 - 2024/07/27 (土) 00:21:29 - おお 抗体によっては固定方法を選ばないといけないということもしばし起こると聞くので、結果が変わることがあっても別に驚かない。

(無題) 削除/引用 No.12467-3 - 2024/07/26 (金) 23:59:59 - G25 微小管は固定法によっては脱重合してしまって構造が観察できない

(無題) 削除/引用 No.12467-2 - 2024/07/26 (金) 19:05:44 - qq microtubleだったかで、そんなことがあると聞き及んでいます。 抗体のせいなのか、抗原の固定され具合の違いなのか私にはわかりません。

蛍光抗体法と固定方法の件 削除/引用 No.12467-1 - 2024/07/26 (金) 17:41:28 - TCA 培養細胞を材料として特定のタンパク質の細胞内局在を蛍光抗体法で調べる際に、固定方法（冷メタノール -2度で5min　 or　 4%PFA, 室温、10min)の違いで結果が大きく変わることはありますか。抗体自体の質はWBとIPで確認してます。

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