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(無題) 削除/引用 No.12463-7 - 2024/07/29 (月) 11:42:53 - マイケル ありがとうございました。 試行錯誤して改善していきます！

(無題) 削除/引用 No.12463-6 - 2024/07/25 (木) 13:16:09 - マイケル あのさま、ありがとうございます。 組織の大きさはピンセットで用意に取れる大きさで浸っているものをもらっています。極力小さい小さいほうが良いとのことですが、これからリカバリーできますしょうか？ とさま、ありがとうございます。 組織は同じ臓器です。ただ筋ぽかったりプヨプヨだったり微妙に感じが違います。破砕にはビーズ式ホモジナイザーを使用しています。

(無題) 削除/引用 No.12463-5 - 2024/07/25 (木) 11:06:15 - と 組織は全て同じ臓器ですか？臓器により収量は変わります。 組織の破砕はどのような方法ですか？わざわざ再凍結・破砕後にRLTを添加するより、組織にRLTを添加してビーズ破砕やポリトロンで破砕の方が効率が良い気がします。

(無題) 削除/引用 No.12463-4 - 2024/07/25 (木) 10:52:43 - あの RNA laterはうまくいくサンプルと、いかないサンプルがあります。 たとえば脂肪組織だと、浸透する前に融点の関係で組織が硬くなり、浸透しないためRNA分解酵素が働いてしまいます。 また比重が軽い組織も、水面上にでる部分が、RNA laterが浸透するか疑わしくてリスキーです。 それから組織の大きさは極力小さくした方がよくて、ピンセットで容易にとれるぐらいだとリスキーです。 当方は、AllPrep DNA/RNA Kits(mini)を使ったことがありませんが、たぶん他社の同様なカラム方式のトラブルシュートが役にたつと思います。

RNA laterの取り扱い方法 削除/引用 No.12463-3 - 2024/07/25 (木) 09:32:50 - マイケル たこさま、ありがとうございます。 すでにRNA laterに浸けられている状態で、精製をお願いされています。 RNA laterからピンセットで取り出して、キムワイプ上でチョンチョンと溶液をふき取っているのですが、それが問題なのでしょうか？ AllPrep DNA/RNA Kits(mini)で、A260/A230の値が低いときや収量が悪いときの解決方法はないでしょうか。 組織の大きさは小さかったり、大きかったりです。大きすぎる場合には切り取っているのですが、他は全量(1.5mm角弱〜3.5mm角強）使用しています。Qiashredderで遠心すると、ペレットが結構な量でます。 溶液の色が濃い場合やフィルターに着色した場合に収量が悪いのかとメモしているのですがそういうわけでもありません。 貴重な組織とのことで、収量が低かったりA260/A230の値が低いと憂鬱です。 どうかよろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.12463-2 - 2024/07/24 (水) 22:48:19 - たこ RNA laterにつけておかないといけないような理由があるんですかね？ 真偽の沙汰はわかりませんが、RNA later使ってるとなんか上手くいかないと聞いたことがあったので、自分はsnap frozen→-80˚Cで保存でやってました。 無論問題なくいけます。

AllPrep DNA/RNA Kits 削除/引用 No.12463-1 - 2024/07/24 (水) 12:34:56 - マイケル AllPrep DNA/RNA Kits(mini)を用いて、RNA later凍結組織からRNAとDNAを抽出しています。解凍後にRNA laterをキムワイプで吸い取り、組織を再凍結・破砕してからBuffer RLT Plusで溶解しています。 Kitのプロトコール通り、どの組織についても同じように操作しているのですが、収量が大きくばらついてしまいます(RNA:20〜800ng/uL、DNA:10〜200ng/uL）。EBバッファーは常温で使用しています。 またA260/A230の値が低いことが多く、A230以下に大きなピークがあります(RNA・DNAともに:1.0以下が多数）。ちなみに毎回新しいコレクションチューブにしています。 このキットを使ってきれいに精製するコツがありましたらご教授いただければとても助かります。 よろしくお願いいたします。

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