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SDS-PAGEで55 kDaより下のマーカーが分離されない(10% gel) トピック削除
No.12454-TOPIC - 2024/07/20 (土) 00:16:45 - Gel
表題の通りで、途中から泳動バッファを作り直したのですが解決しません。どこを間違えたのでしょうか?ゲルも作り直したのですが、再現あります。
 
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(無題) 削除/引用
No.12454-9 - 2024/07/20 (土) 18:57:05 - Gel
良いアイデアですね。

(無題) 削除/引用
No.12454-8 - 2024/07/20 (土) 06:55:05 - j
このミスはかなり慣れてる人でもたまにやるんだが、経験では、(消費の遅い)pH6.8の方を小さい瓶に、(消費の早い)pH8.8の方を大きい瓶すれば、慌ててる時でも間違えることないです。

(無題) 削除/引用
No.12454-7 - 2024/07/20 (土) 05:59:07 - Gel
そういえば、学生にWBを教えて自分の試薬を使わせたのですが、いつもpH6.8のトリスの試薬瓶をpH8.8の奥に置くのですが、それを確認していませんでした。

皆様、ありがとうございます。解決しました。

お恥ずかしい限りです。

(無題) 削除/引用
No.12454-6 - 2024/07/20 (土) 05:50:06 - Gel
ゲル用トリスのpHを上下のゲルで取り違えたという可能性はあるでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.12454-5 - 2024/07/20 (土) 05:31:55 - Gel
アクリルアミドはバイオラド製、泳動バッファはトリス-グリシンです。

マーカーは昨日まで使って問題なかったものです。

気になるのは、200 V、40 mA (2 gels)で流れ、いつもの所要時間でゲルの半分までしか泳動されず、さらに下まで流すと、55 kDaより上はさらに分離され、以下は変わらず圧縮されたシングルバンドになっていたことです。それと、技官の人が作った10x泳動バッファを希釈して使うのですが、その日間違えて1xが作製されていたらしいです。仮に0.1xで泳動したとすると、泳動速度が極端に遅くなるはずですよね?

(無題) 削除/引用
No.12454-4 - 2024/07/20 (土) 05:04:16 - おお
TRIS-GlycineとかpHを調整する必要のないバッファーもありますけどそういうのは大丈夫でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.12454-3 - 2024/07/20 (土) 02:19:04 - へえ
マーカー自体がヘタレてて
55以下が見えないとかじゃなくて?

ゲルに問題があって途中で泳動先端が止まるとかなら
55以上も下まで抜け落ちない気がするけど
Run時間倍にしたらどうなるんだろ

(無題) 削除/引用
No.12454-2 - 2024/07/20 (土) 01:32:13 - おお
30%アクリルアミド溶液とかも自作でしょうか?ならばbisacrylamideが適切な量入ってますでしょうか?

SDS-PAGEで55 kDaより下のマーカーが分離されない(10% gel) 削除/引用
No.12454-1 - 2024/07/20 (土) 00:16:45 - Gel
表題の通りで、途中から泳動バッファを作り直したのですが解決しません。どこを間違えたのでしょうか?ゲルも作り直したのですが、再現あります。

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