いつもお世話になります。
ある遺伝子のConditional KO mouseを作成途中なのですが、Total KO mouseではうまく出来ておりましたGenotypingがうまく出来ずに苦慮しております。
DNA濃度を調整して15ug/ul程度で行っており、Quick Taqを使用して、TOYOBOプロトコール、アニリング濃度を62度にして一時的にhetero, homoの違いはわかるようになったのですが、濃度を未調整、調整済みでバンドが出たり出なかったりするような現象が起こっております。
プライマーを変更した方がいいとは思っているのですが、もともとmouseを受注した指導教官が鬼籍に入っており、それも難しい状況です。
大変お忙しい中恐縮ですが、再現性が困難なGenotypingについて、経験のあられる先生方が多い、この場でご教示いただければ幸いです。
よろしくお願い申し上げます。 |
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