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リコンビナントタンパクを再構成する際のキャリア必要性 トピック削除
No.12408-TOPIC - 2024/06/28 (金) 13:41:16 - haha
IFN-γのリコンビナントタンパク(粉末)を再構成して使用する予定です。
データシートには「 It is recommended to reconstitute the protein in sterile 1x PBS containing 0.1% endotoxin-free recombinant human albumin (HSA).」とありますが、私がこれから行う予定の実験ではHSAの影響がありそうでできれば入れたくありません。

PBSで再構成した後、小分けにして-30℃で保存しているのですが、
活性がなくなってしまうなどが不安です。
皆様はどうされているのか教えていただけると幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.12408-9 - 2024/07/01 (月) 10:19:08 - NOD
rIFNgは数万倍に希釈して使うことが多く、HSA/BSAも同じだけ希釈されますが、それほどHSA/BSAの混入はシビアに影響するのでしょうか。

継代した細胞からの持ち込みはその位残っているように思うのですが。

(無題) 削除/引用
No.12408-8 - 2024/06/30 (日) 13:27:47 - おお
血清不含のメディウムにも意外とBSAとか入ってたりしますね。Animal freeでもRecombinantのタンパク成分が入ってたりしますし。

(無題) 削除/引用
No.12408-7 - 2024/06/30 (日) 12:40:24 - G25
血清飢餓の目的が成長因子などの作用の排除であれば、
血清不含と血清アルブミン添加は両立するとおもいますけど。

(無題) 削除/引用
No.12408-6 - 2024/06/30 (日) 12:23:41 - haha
Tr様

実験は血清不含のメディウムで行うので、なるべくBSAやFBSは入れたくないのです、、、。

>[Re:3] Trさんは書きました :
> HSAがいやならBSAとかFBSとかではダメなの?どうせ、最後は血清入り培地に入れて使うのではないですか?

(無題) 削除/引用
No.12408-5 - 2024/06/30 (日) 12:22:14 - haha
おお様

 ありがとうございます。とりあえず、無しでもいけそうということで安心しました。ただ、バッファーは普通のPBSなので使ってみてのような感じになりそうですね。



>[Re:2] おおさんは書きました :
> https://www.rndsystems.com/products/recombinant-human-ifn-gamma-protein_285-if
>
> この商品の285-IF/CFはCarrier FreeでSodium Succinate, Mannitol と Tween® 80を含むバッファーで中で凍結乾燥されていて、それらを含むことで安定性を確保しているようです。
>
>
> https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378517303003880?via%3Dihub
> この論文では、HSAなしではアグルからということでHSAなしで保存できる方法を模索してますね。

(無題) 削除/引用
No.12408-4 - 2024/06/29 (土) 04:56:15 - おお
https://www.biolegend.com/de-de/products/recombinant-human-ifn-gamma-carrier-free-4173

0.22 µm filtered protein solution is in 10mM Sodium succinate, 4% Mannitol, pH 5.0.

こちらの商品は溶液の状態で販売していて、その溶液の組成が明記されてますね。
キャリアーは入れても良いと書かれていて、入れなくても使えるようです。

(無題) 削除/引用
No.12408-3 - 2024/06/28 (金) 19:25:46 - Tr
HSAがいやならBSAとかFBSとかではダメなの?どうせ、最後は血清入り培地に入れて使うのではないですか?

(無題) 削除/引用
No.12408-2 - 2024/06/28 (金) 14:16:14 - おお
https://www.rndsystems.com/products/recombinant-human-ifn-gamma-protein_285-if

この商品の285-IF/CFはCarrier FreeでSodium Succinate, Mannitol と Tween® 80を含むバッファーで中で凍結乾燥されていて、それらを含むことで安定性を確保しているようです。


https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378517303003880?via%3Dihub
この論文では、HSAなしではアグルからということでHSAなしで保存できる方法を模索してますね。

リコンビナントタンパクを再構成する際のキャリア必要性 削除/引用
No.12408-1 - 2024/06/28 (金) 13:41:16 - haha
IFN-γのリコンビナントタンパク(粉末)を再構成して使用する予定です。
データシートには「 It is recommended to reconstitute the protein in sterile 1x PBS containing 0.1% endotoxin-free recombinant human albumin (HSA).」とありますが、私がこれから行う予定の実験ではHSAの影響がありそうでできれば入れたくありません。

PBSで再構成した後、小分けにして-30℃で保存しているのですが、
活性がなくなってしまうなどが不安です。
皆様はどうされているのか教えていただけると幸いです。

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