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poly(I:C)刺激でPKRがリン酸化しない トピック削除
No.12396-TOPIC - 2024/06/25 (火) 07:51:56 - PKR
HEK293T細胞にpoly(I:C)をリポフェクションして、PKRのリン酸化を調べました。予想とちがい、リン酸化されていませんでした。同じ日に別の細胞で試すと、PKRはリン酸化されました。これをどう説明しますか?
 
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No.12396-8 - 2024/07/04 (木) 00:28:42 - PKR
HEK293にTLR3は発現していない、という記述を見ました(データ、文献なし)。

おおさんのおっしゃる通り、PKRに直接結合して活性化すると思います。
おおさんの文献を参考に実験をやり直してみます。

(無題) 削除/引用
No.12396-7 - 2024/07/04 (木) 00:12:38 - おお
>[Re:6] jmk、lさんは書きました :
> poly(I:C)の受容体ってTLR3とかだと思うんだが、HEC293TってもともとTLR3とか発現してるの?
> 全然してないとか、しててもすごい低いレベルなら、遺伝子入れて強制発現させないとうまくいかないような気がします。

リポフェクションで細胞内に導入して、直接PKRと結合させ活性化してる様なんだが。TLR3の下流ってPKRなんですか?

(無題) 削除/引用
No.12396-6 - 2024/07/03 (水) 19:01:32 - jmk、l
poly(I:C)の受容体ってTLR3とかだと思うんだが、HEC293TってもともとTLR3とか発現してるの?
全然してないとか、しててもすごい低いレベルなら、遺伝子入れて強制発現させないとうまくいかないような気がします。

(無題) 削除/引用
No.12396-5 - 2024/06/30 (日) 09:57:53 - おお
>[Re:4] PKRさんは書きました :
> ありがとうございます。
> 下の文献は内在性のPKRですね。


> PMID: 25074923

両方やってます。FIGURE 4.のBが内在性です。誘導はVSVの感染による内在性のリン酸化をみています。ほかはPKR 発現プラスミドをつかって、変異体などとの比較をしているとか、強制的に発現させたものです。

> PMID: 35858300
HEK-293FT複数の細胞を使ってますが、HEK-293FTをつかってpoly(I:C)でPKRリン酸化を見ている実験が含まれてます。

プラスミドを使って発現させて見たのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.12396-4 - 2024/06/29 (土) 17:03:18 - PKR
ありがとうございます。
下の文献は内在性のPKRですね。

(無題) 削除/引用
No.12396-3 - 2024/06/29 (土) 09:12:01 - おお
PMID: 25074923
PMID: 35858300

(無題) 削除/引用
No.12396-2 - 2024/06/29 (土) 06:34:52 - PKR
HEK293(T)細胞でPKRがキナーゼとして機能するかご存知の方いませんか?

poly(I:C)刺激でPKRがリン酸化しない 削除/引用
No.12396-1 - 2024/06/25 (火) 07:51:56 - PKR
HEK293T細胞にpoly(I:C)をリポフェクションして、PKRのリン酸化を調べました。予想とちがい、リン酸化されていませんでした。同じ日に別の細胞で試すと、PKRはリン酸化されました。これをどう説明しますか?

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