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(無題) 削除/引用 No.12393-4 - 2024/06/25 (火) 10:17:33 - toto おおさんの言われるとおりで、7の超遠心で顆粒同士に力が加わってtubeの壁にべたっとくっついてしまって、懸濁しにくくなった結果、凝集した顆粒径を測定してるものと思われます。 こういう場合によくやるのはtubeの底に例えば2M sucroseや80%グリセロールをほんのちょっと、例えば、1mLのtubeであれば10uLくらい敷いておくことです。これによってその上に顆粒が集まり、少し浮く状態になるので、再懸濁が容易になります。遠心後にはその10uLなどの層はみえなくなりますが、懸濁してみると違いがはっきりわかりますよ。

(無題) 削除/引用 No.12393-3 - 2024/06/25 (火) 02:17:56 - おお https://www.nature.com/articles/s41598-020-57497-7 Density cushionを使うてもあるけどね。 ⑧⑨のあとで、弱い遠心をしてみてはどうかともおもう。10000gで５分とか？

(無題) 削除/引用 No.12393-2 - 2024/06/24 (月) 11:13:13 - qq 細胞なしの培地だけで同じ操作を行ったことはありますか？ 培地は無血清なのでしょうか？ 血清中には思いの外に不溶物が含まれているように感じるので、使う前の培地の処理の方が重要なのではないかと想像します。 あと、培地上清の凍結はまずいんじゃないかと思います。

超遠心法による細胞外小胞分離のコツ 削除/引用 No.12393-1 - 2024/06/23 (日) 23:53:16 - haru 細胞上清を超遠心して細胞外小胞(EVs)精製したいと思っています。 以下に示すように精製し、Zetasizerで粒子径を測定しているのですが、 結果が不安定(Y軸が1.0を超える、粗大粒子を示唆するスパイクが見られるなど)で困っています。どこか改善するところはあるでしょうか。 教えていただけると幸いです。 【方法】 ①細胞上清を回収する(すぐに使用しない場合は-80℃保存) ②1000g, 5min, 4℃で遠心(死細胞おとす) ③2000g, 10min, 4℃で遠心(粗大粒子の除去) ④10000g, 30min, 4℃で遠心(マイクロベシクルやアポトーシス小体の除去) ⑤超遠心(100000g, 70min, 4℃) ⑥上清を捨ててfiltered PBSを遠心チューブに入れる ⑦超遠心(100000gm 70min, 4℃) ⑧上清を捨て、100µlのPBSを入れ、ボルテックス+ピペッティングし回収 ⑨チューブにもう100µlのPBSを入れ、ボルテックス+ピペッティングし回収 個人的には、⑧⑨でピペッティングしすぎるのが良くないのかなと思うのですが、解決法が分からず困っています。どうぞよろしくお願いいたします。

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