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(無題) 削除/引用 No.12358-4 - 2024/06/06 (木) 17:39:30 - IP ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.12358-3 - 2024/06/06 (木) 09:34:13 - おお あ、それとMASS Specはあなたがサンプルをロードして分析するのですか？そうでなくて依頼することがたいていだと思うので、依頼先に現状を説明してそのサンプルでどのような（どの程度）結果が得られるのかなどきいて、あなたが期待している結果が得られるのか、得られなければどう改善したらいいのか話し合ってください。

(無題) 削除/引用 No.12358-2 - 2024/06/06 (木) 08:47:32 - おお 使うスペックにもよるでしょうけど理想的なコンディションでamol（attomol)レンジの検出力があるようです。また、違う尺度ではWBよりも感度が高いといわれています。WBの感度ですらピコグラムオーダーで銀染色で染まらないレベルまで検出できるのですから、銀染色で染まるぐらいあれば結構確実だとおもいます。 またIPでどれくらいのバンドバンドが得られるかは（バンドの濃さ、数両方）、蛋白や実験によってバリエーションがありすぎると思うので、一概にうまく行っているとかいないとか判断しかねます。蛋白の相互作用もいつもべったりくっついている蛋白複合体もあれば、動的なものもあるはずです（例えば結合して、リン酸化されて、リリースされて、脱リン酸化されたらまた結合するとか）。 あえていうなら、そのIPでWBなどで既知の相互作用する蛋白が見れるが、コントロールでは検出できないというのが一つの基準ではないでしょうか。

co-IP産物の銀染バンドが少ない 削除/引用 No.12358-1 - 2024/06/06 (木) 01:51:50 - IP エンドの抗体をもちいたIP産物を銀染すると、共沈産物のバンドが５本くらいしか見えません。 10 cm一枚分の細胞からIP効率は10％程度で、五分の1を流しています。 1％ NP40入りのトリス等張バッファーで細胞を抽出、IPし、 0.５％Triton入りのトリス等張バッファーでWashしています。 バッファーが悪いのでしょうか？ それと、IPされた標的蛋白質の量は、結合因子をマス解析で検出するには、一般にどのくらい必要でしょうか？

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