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(無題) 削除/引用 No.12353-5 - 2024/06/05 (水) 14:14:40 - あいうえお おお様、tts様 ご返答ありがとうございました。 やはり蛍光顕微鏡がないと厳しそうですね。 蛍光顕微鏡を保有していないため、 可能な限りプレートリーダーで測定したかったのです。 今後、レンタル等も検討したいと思います。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.12353-4 - 2024/06/05 (水) 10:31:59 - tts 私も昔、プレートリーダーでROSではありませんが別の物質の蛍光測定をしたことがあります。 10 well 測定で1wellしか反応がなかったというような、限られてたwellでしかレスポンスが得られなかったという記憶があります。 その際にメーカーから聞いた話ですが、機種にもよるが励起光の幅 (直径) が狭いため、励起光が当たる場所に細胞がいなければ結局の所見かけ上レスポンスがでない、ということでした。 ちなみに私が使用していた機種では、細胞一個と同程度の幅（50µｍ ?、うろ覚えです）しかありませんでした。 (以降はおおさんのコメント同様ですが) その後、蛍光画像を取り込んでみるとしっかりと反応しており、論文にはそっちのデータを使用したという経験があります。

(無題) 削除/引用 No.12353-3 - 2024/06/05 (水) 08:07:33 - おお 同じような条件で蛍光顕微鏡で蛍光強度が上がっているか確認できますか？ また、測定値はどんな感じですか？

(無題) 削除/引用 No.12353-2 - 2024/06/04 (火) 15:24:33 - あいうえお 申し訳ございません。 文字化けしていました。 DCFH-DA,10マイクロMです。 よろしくお願いいたします。

ROSの測定方法につきまして 削除/引用 No.12353-1 - 2024/06/04 (火) 15:21:33 - あいうえお はじめまして。 細胞のROSの測定方法について、ご教授願います。 HaCaT細胞にUVBを当て、ROSを測定する実験を行っています。しかし、うまく測定をすることができません。 プロトコールは以下の２種類を試しました。 ・播種over night→UVB照射→DCFH-DA10µM,30min→wash×2→蛍光プレートリーダーで測定(Ex:485, Em:525)　 ・播種over night→DCFH-DA10µM, 30min→wash×2→UVB照射→測定 培養中のみFBS,抗生物質込みのDMEMを使用し、DCFH-DAはDMEM(FBSfree)、 UVB照射、wash、測定時はHBSSを使用しています。 UVB照射の有無で測定値に大きな変化が見られませんでした。 ご協力のほど、よろしくお願いいたします。

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