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(無題) 削除/引用 No.1234-2 - 2013/01/07 (月) 12:56:21 - 僕 マスアレイ経験者です。もう解決されているかもしれませんが・・・ 使用しているプライマーは自身で設計されたものですか？ 私はマスアレイの導入、立ち上げを担当した事があるのですが、導入する際に企業主催のトレーニングを受けました。 その際にバリデートされたプライマーを使用した記憶があります。サンプルは0%,100%メチル化を用いて同様に調製したものを使用しました。 企業に問い合わせをし、バリデートされたプライマーを試すことが可能かどうかを確認されてはどうでしょうか。

MassARRAYの再現性 削除/引用 No.1234-1 - 2012/12/10 (月) 15:36:03 - 109個めの煩悩 いつも参考にさせていただいております。 現在DNAメチル化に関する研究に参加しておりますが、 バイサルファイト処理後のDNAをMassARRAYにてメチル化の割合を調べる実験でトラブルに見舞われています。 0%と100%メチル化のサンプルを作成して、この2つのサンプルを一定の割合で混合して25%、50%メチル化のサンプルを作って、そのあとバイサルファイト処理してMassARRAYでメチル化の割合を測定する手法になっています。 リアルタイムPCRのようにコントロールサンプルでメチル化の割合の検量線を作成して、この検量線にテストサンプルの数値を当てはめてメチル化の割合を計算するのですが、同じコントロールサンプルを使用しても毎回MassARRAYで得られる数値がバラバラです。 ex)100%メチル化サンプルの場合：測定1回目で0.99、測定2回目で0.78 毎度毎度検量線がきちんとかけなかったら再解析しているのですが、違う日に市販のバイサルファイト処理キットで処理したコントロールサンプルセット同士を同時に解析しても検量線がかけるセットとかけないセットに分かれます。そのためこの解析法の信頼性に非常に疑問を持つようになりました。 Massでの解析に経験のある方にアドバイスをお願いいたします。

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