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(無題) 削除/引用 No.1231-5 - 2012/12/10 (月) 10:29:40 - まっくろん 　FACS Caliburをお使いとのことですので，最低3カラーは検出出来ますよね。PIでも合わせて染色し，死細胞を外すのも手かもしれません。PIは確かFL3でも検出できたはずなので，FITCやPEと同時に使えるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1231-4 - 2012/12/10 (月) 09:45:08 - flow-joe FL1,FL2それぞれのヒストグラムで調整すれば見やすいですよ。

ありがとうございます。 削除/引用 No.1231-3 - 2012/12/09 (日) 11:46:02 - かの アドバイス頂き、本当にありがとうございます。 縦軸と横軸はFL1-H logとFL-2 logに設定しております。 不純物の件ですが、過去のトピックで死細胞が多い場合に "トゲをのばしたような形"になるような書き込みを見つけました。 http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2011/biotechforum.cgi?mode=view;start=1;Code=879 　　 これは、染色後の話なので同じなのかは分かりませんが、 私もPIなどで死細胞を除かずに、FSC,SSCで左下の細胞集団を除く ゲートを設定していました。またFSC,SSCは、解説本のように集団として固まらずに、 接着培養細胞のせいなのか全体にブロードに広がってしまったので、 比較的広くゲートをかけました。 もしかしたら、死細胞になると自家蛍光が強くなるのでしょうか。 一応、FSC,SSCで再びゲートをかけ直してみます。 何か気付いた事がありましたら、教えて頂ければと思います。 宜しくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.1231-2 - 2012/12/09 (日) 03:28:26 - 通りすがり 縦軸と横軸を同じに設定していませんか？ 当然、両軸が同じであれば右肩上がり、正に比例式のようなドットプロットになると思います。 もしくは、不純物が多いか…。

FACSの未染色時のドットプロットの形について 削除/引用 No.1231-1 - 2012/12/08 (土) 22:54:31 - かの いつも大変お世話になっております。 お恥ずかしい話ですがFACSに詳しいものが辞めてしまった為に FACS(Calibur)を初めて使うことになり、説明書を片手に解析を始めているのですが、一つ初歩的な部分でつまずいてしまい困っていまして、お詳しい方に 教えていただけないかと思っております。 手順を書かせて頂くと、 　 1.培養癌細胞をEDTA+メッシュでバラバラにして、FITC標識とPE標識一時抗体で染色。 2.未染色サンプルを使ってFSC, SSCで検出してゲートをかける。 3.FL1とFL2でプロットシートを作って、左下にかたまり(10^1-10^2)になるまで、それぞれの電圧/ゲインを調整する。(解説本より) 4.蛍光4分子マーカーをつける。 5.FITC単染色サンプルでFL2-%FL1を移動してコンペセーションを調整する。 6.PE単染色サンプルでFL1-%FL2を移動してコンペセーションを調整する。 7.2重染色のサンプルで、データを取る。 という感じなのですが、3.の時点で丸っぽいかたまりの様にならず、 右上がりの斜めの少し太い線のようになってしまいます。 未染色なので、コンペセーションがおかしいという話ではないのかも しれませんが、自家蛍光があるのかもと思いコンペセーションを適当に いじると、一応かたまりのようにはなりますが、その後に感度調整や FITCのコンペセーションをやるので、意味がないような気がしますし、 データも上手く取れていない気がしています。 もし、初歩的なことでも"ココを設定していないでしょ"という点に 気が付いた方がいらっしゃいましたら、お教え頂けないでしょうか。 宜しく御願い致します。

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