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Next -SeqとDNBSEQ-G400 トピック削除
No.12265-TOPIC - 2024/04/09 (火) 10:50:08 - ship
ヒトのゲノムのエクソーム解析なのですが、Next -Seqで解析したものとDNBSEQ-G400で解析したものと一緒に解析してもよいものなのでしょうか?というのも、以前Next -Seqで解析したものがあるのですが、それに外注で追加を検討しているのですが、DNBSEQ-G400の方が圧倒的に安価でした。DNBSEQ-G400を使えたいのですが、一緒に解析してもよいかご教授いただければ非常に助かります。宜しくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.12265-3 - 2024/04/14 (日) 19:06:12 - asan

例えば、コントロールはAという方法で、ノックアウトはBという方法でデータをとってそれらを比較した、ってなら少しクレームがつく気はします。

しかし、レプリカでN=1はAという機械でN=2はBという機械でシーケンスをかけた、というならばシーケンスの条件が等価である限り、シーケンサーが何かという点においてはクレームはつかないのかなあと思います。

しかし、Aではシングルリードで、残りをペアリードとかやり方そのものや原理が大きく異なる方法でシーケンスを行ったものを統合する場合は注意が必要でしょう。特に、定量的質量分析なんかは機械によってMS/MS同定や定量方法が全く異なるので機械を変えて混ぜて議論するのは危険ですね。

RNAseqであれば、理論上はシーケンサーによる差はないものと思われるので等価な方法でやってる限りは問題ないと思います。当然、データのトリミングやノイズ処理などはきちんとデータを見てやることが前提です。ただ、データを統合する前にそれぞれの機械でのデータで質的に違いがなさそうかは全体の統計値(同定数とかクオリティを満たしたリード数とか)は確認しておくべきだと思います。

最初から混ぜるのは気になるというならば、それぞれでcount dataなどにしてしまってから統合してもいいとは思いますけどね。

(無題) 削除/引用
No.12265-2 - 2024/04/09 (火) 16:15:04 - 橘
あなたの手元のサンプルで混ぜて良いという証拠はどこにもない。
ならば、自分で作れば良い。
つまり、NextSeqで解読済みのサンプルをいくつか、DNBSEQで解読するサンプルに加えてやり、結果を比較してほぼ同じであることを確認できれば混ぜて解析できる。
ただし、全然違うという結果が出てしまった場合には困ることになる。
一番楽なのは、解読済みも含めて全てDNBSEQで解読すること。
なお、研究目的によっては、同じNextSeqであっても異なるシーケンスラン間で混ぜていいかどうか検討が必要な場合もあるので、NextSeqだから何も考えずに混ぜられる、というわけではない。

Next -SeqとDNBSEQ-G400 削除/引用
No.12265-1 - 2024/04/09 (火) 10:50:08 - ship
ヒトのゲノムのエクソーム解析なのですが、Next -Seqで解析したものとDNBSEQ-G400で解析したものと一緒に解析してもよいものなのでしょうか?というのも、以前Next -Seqで解析したものがあるのですが、それに外注で追加を検討しているのですが、DNBSEQ-G400の方が圧倒的に安価でした。DNBSEQ-G400を使えたいのですが、一緒に解析してもよいかご教授いただければ非常に助かります。宜しくお願いいたします。

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