非還元条件下で行ったSDS-PAGEゲルからタンパク質を抽出し、還元状態で再度SDS-PAGEを行いたいのですが、タンパク質抽出の回収率が悪くうまくいきません。
現在やっている方法としては、SDS-PAGE後のゲルをCBB染色せずに、切り出したのち1%SDS、20mMTris-HCl溶液(200uL)に浸しオーバーナイトで攪拌し抽出しています。
抽出溶液の上清を用いて還元状態のSDS-PAGEを行なっていますが、泳動後のゲルをCBB染色で確認したところ1ug程度しか回収できていないようです。
タンパク質を高収率で回収できる方法が他にもありましたらご教授いただけると嬉しいです。
よろしくおねがいいたします。 |
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