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(無題) 削除/引用 No.12145-4 - 2024/02/10 (土) 13:58:45 - 老人 全く、おしゃる通りで、１）に関してはmCherryの抗体を使ってきちんと発色しました（今後めんどくさいですけど）。２）に関しては、確かにDAPIで目的は果たせておりますが、いかんせん、２つもおっしゃるように気持ち悪いです。一般的ではない、と言うことで、少し安心しました。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.12145-3 - 2024/02/09 (金) 09:51:29 - Kras BFP-GFP-mCherry-tdTomato-E2Crimson、DAPI-Alexa405-488-546-647を色々な組み合わせで組織染色しましたが、蛍光の相互干渉と感じる現象にお目にかかったことはなかったですね。 今後の実験のことを考えて原因の特定をお進めになることと思いますが、1)については抗mCherry抗体を使い、2)もNeuNの代わりにDAPI染色すれば、当座の目的は果たされるように思います。 ちなみにNeuNの組織染色ですが、しっかりと固定した組織を早めに染めるとキレイに核が染まりますが、時間が経ったサンプルですと核がぼやけ細胞質が染まり全体としてシグナルが弱くなるのでご注意ください。

(無題) 削除/引用 No.12145-2 - 2024/02/08 (木) 05:10:32 - おお 観察の仕方（顕微鏡の設定）でずいぶん印象が変わると思いますが、その過程はわからないのでそれ以外としては、 １）は固定したものと、固定してないもので比較してますか？mCherryは詳しく知らないですが、蛍光タンパクは固定によりシグナルが減弱することがしばし問題になります。

蛍光の相互干渉？ 削除/引用 No.12145-1 - 2024/02/07 (水) 20:07:12 - 老人 １）CMV-mCherryをAAVrh10にいれてニューロンに発現させて、きちんと発現することは確認しています。 オリゴデンドロサイトに発現するか確かめるため、PDGFRaの抗体＋488で染めたところ、mCherryが全て消えてしまいました。PDGFRaの抗体＋488単独では綺麗に光ります。 ２）Cre-eGFPをAAV9のいれてEGR3-f/fマウスに発現させると、EGR3の発現はKnockdownできます。この切片を、eGFP、EGR3をAlexa568、NeuNをAlexa405で蛍光顕微鏡を見ると、Alexa405が全て消えてしまいました。NeuN＋Alexa405単独では綺麗に光ります。 こんなことあるのでしょうか？誰かが相互干渉だ、と言ってますが、こんなにある触れた組み合わせで起こるのでしょうか？教えていただけると大変ありがたいです！

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