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(無題) 削除/引用 No.12142-3 - 2024/02/07 (水) 06:47:25 - mp WTをadd backして元に戻ればOKでは？

(無題) 削除/引用 No.12142-2 - 2024/02/07 (水) 04:48:04 - おお ＞おそらくsingle cell化して世代も経ているため、細胞のベースラインに差が出てしまったのではと愚考 コントロールも作っておくべきでしたね。まあそれでもはっきりするかわからないですが。複数のKO lineを持ってますか？ 変異が通常の培養状態でもファゴサイトーシスを誘導している可能性はないですか？ ＞ベースラインが異なっても刺激に対する違いが見られれば、それで研究としては成り立つのでしょうか。 それは他の実験を含めアプローチ次第です。KDも念の為作っておくといいかもしれません。シングルクローンでなくてもWBでしっかりとKDされているのが確認されていたら大抵の実験には使えると思いますから。

Cas9 KOしたcell lineは信用できない？ 削除/引用 No.12142-1 - 2024/02/07 (水) 02:53:42 - 炎 Cas9でKOしたcell lineを作成し、変異が入らなかった細胞と比較しています。 flow cytometryで刺激前と刺激後で、ファゴサイトーシスの差があるのかないのかを調べているのですが、刺激うんぬん以前に、変異が入った細胞と入っていない細胞で、蛍光のベースラインが全くことなります。これは変異が入った細胞の中でも、入っていない細胞の中でも大きく異なります。 おそらくsingle cell化して世代も経ているため、細胞のベースラインに差が出てしまったのではと愚考しているのですが、この状況において、実験を進めるのは妥当なのでしょうか。 ベースラインが異なっても刺激に対する違いが見られれば、それで研究としては成り立つのでしょうか。KO cellとWT cellを一つのFigureに載せたら、かなりの突っ込みを受けると思いますので、蛍光の変化率をグラフにすればいいのでしょうか。

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