>読んで下さってる皆さまへ
ちょっとまとめました。
1)Wet Transferでは無くてTrans Blot Turboの7分間トランスファーを行った場合、30kDaタンパクはウェスタンブロットで検出することが出来た。
2)更に、ウェスタンブロットでは無くてメンブレンをCoomassie Blueで染めた場合に,この30kDaバンドを染めることが出来た。
3)従って、ゲル泳動中に30kDaバンドがデグッたりしたとかいうことは無いと考えられる。30kDaのタンパクを泳動し、そのサイズに沿った泳動距離の位置に持ってくるところまでは上手くいっていると考えられる。
4)しかし、トランスファーをWet Transferに変えたら、30kDaのバンドはCoomassie Blueで検出することが出来なかった（同じゲルに流した100kDaの別のタンパクではバンドは綺麗に染まったのだが）。
5)トランスファー後のゲルをCoomassieで染めたところ、残留タンパクは全く見られなかった。従って、全てのタンパクがゲルから出てメンブレン側にトランスファーされたと考えられた（特殊な話として、タンパクがゲルから出ないままゲル内で跡形も無く壊れてしまった、という可能性を否定は出来ないけど、そんなことあるだろうか？）
6)そこで、私は30kDaタンパクはメンブレンをすり抜けてしまった可能性を考えている。
7)ウエットトランスファー後のメンブレンをウェスタンブロットしてタンパクの検出、はまだ試したことがありません。 |
|
このスレッドをはてなブックマークに追加