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(無題) 削除/引用 No.12113-7 - 2024/02/02 (金) 14:42:58 - wwn Zelo Blant使ったことあります。(それこそ15年以上くらい前) その時感じた印象は 突出末端より効率は悪い。 TOP10を使った方が明らかに良かった。(必須と言っても過言では無い印象) です。 TA cloningはIn-Fusionが出るまではよく使っていましたが、こちらではもう出番はなさそうです。 *他のラボメンバーは試薬の存在すらしらないかも

(無題) 削除/引用 No.12113-6 - 2024/01/30 (火) 09:33:54 - のなめ 横からですいませんが、Blunt end cloningの試薬を使ったことがないのですが、効率ってTAと比べてどんなもんなんでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.12113-5 - 2024/01/30 (火) 09:33:21 - TATA み様 ありがとうございます。 ラボに眠っていたキットを使えたらと思いまして、質問させていただきました。 Blunt endでのTA cloningキットもあるのですね。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.12113-4 - 2024/01/30 (火) 09:32:17 - TATA G25様 ありがとうございます。 TAクローニングは15年ぶりに行うもので、キットそのものも15年とか20年前のものでした。 なので最新のは手元にありません。 一応予備検討でワークすることは確認できているので、それで行えたらと。 その際にはPrime Star Maxで増やした後、精製せずに、Taq polを加えて72度、10 min反応させてからTA cloningをしたのですが、うまくいきました。 今思えば、カラムでPrime Star Maxを除いてからTaqを加えた方が効率はずっと高かったろうということでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.12113-3 - 2024/01/29 (月) 18:50:43 - み KODはblunt末端やから　わざわざアデニン付加してTA cloningせんでも Zero Blunt® TOPO®ベクターというblunt末端クローニングキットに直接入れたらええがな。

(無題) 削除/引用 No.12113-2 - 2024/01/29 (月) 18:08:55 - G25 >さもないと、TaqによるA-tailが、KOD Oneにより除かれてしまいかねないではと疑問があります。 そのとおり。 カラムあるいはPCI抽出などでKODを除去する必要があります。 あるいは、KODのPCR産物をTAクローニングするためのこんな製品もあります。 https://lifescience.toyobo.co.jp/detail/detail.php?product_detail_id=146 抗体でKODの3'活性をブロックしながらdA突出付加反応をおこないます。

TAクローニング時の疑問です。 削除/引用 No.12113-1 - 2024/01/29 (月) 17:33:34 - TATA お世話様です。 TA cloningを行う前に、KOD Oneで増幅したPCR産物に直接Taqポリメラーゼを加えてA-tailingしていますが、Taqを加える前にカラムで精製すべきでしょうか？ さもないと、TaqによるA-tailが、KOD Oneにより除かれてしまいかねないではと疑問があります。 教えていただけたら嬉しいです。

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