Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

RNAの電気泳動 バンドの本数 トピック削除
No.12067-TOPIC - 2024/01/08 (月) 21:42:54 - りんご
いつもお世話になっております。

Total RNAを抽出した後に品質チェックのために電気泳動にかけています。

以前まではトリゾールとクロロホルムを用いた方法で抽出をしており、その際にはバンドが28Sと18Sと5Sリボソームの3本見えていました。

一方で、現在は時短のためにカラムを用いた方法で抽出をしており、バンドは28Sと18Sの2本見えています。

文献によっても、2本の泳動画像と3本の泳動画像が存在していますが、これはつまり、見えるバンドが2本でもRNAの抽出が上手くいっていると考えて大丈夫ですか?
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.12067-5 - 2024/01/09 (火) 17:49:05 - G25
LMW RNAの回収効率は方式やキット製品によってかなり違うようですね。
ttps://www.researchgate.net/figure/Profile-of-total-RNA-isolated-by-using-five-commercial-kits-a-Denaturing-gel_fig1_283119835

ttps://www.researchgate.net/figure/Comparison-of-total-RNA-and-low-molecular-weight-LMW-RNA-samples-isolated-from-cactus_fig1_50195249

ttps://www.lubio.ch/blog/norgens-rna-purification-sic

conventionalなRNA精製ではtRNAくらい小さいRNAはほとんど回収されないものだと思っていました(精製されたtotal RNAにはtRNAはほぼ無い)。
またRNAをLiClで沈殿察せると多糖類やDNAが除去できてきれいなRNAの純度を上げることができるので重宝されていましたが、反面LMW RNAをロスする危険もありました。同様のことはTRizolでIPA沈殿するときprecipitation solution (確かクエン酸ナトリウムを主とする塩溶液)を加えてIPAを減らすという変法にも言えます。


LMW RNAの回収率は、もっぱらprotein coding mRNAをNorthernやcDNAで追いかけていた時代はあまり問題にされていなかったですが、近年miRNAが注目されてきてクリティカルになってきた印象があります。
とにかく昔も今も28Sと18Sしか見えなくても、ほとんどの実験には使えてきたことは確か。今ではRIN (RNA integrity number)で品質評価するのが普及しているけど、指標にするのは28Sと18S rRNAですよね。

ただ、サンプル横断的に定量的な比較をする時、LMW RNAの回収効率がことなる方法が混ざっていると、バイアスがかかる可能性はあるかも。




余談ですが、 リンク先の絵をみるとNavagenのは格段にLMW RNAの回収率が良さそう

(無題) 削除/引用
No.12067-4 - 2024/01/09 (火) 10:52:05 - りんご
ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.12067-3 - 2024/01/09 (火) 07:01:55 - あの
念のためですが、単に、バンドが2本見えてるだけではダメで、28sと18sの比率も大事ですから


https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/real-time-pcr-basics/real-time-pcr-troubleshooting-tool/gene-expression-quantitation-troubleshooting/abnormal-amplification-curves/amplification-occurs-later/rna-sample-may-be.html

(無題) 削除/引用
No.12067-2 - 2024/01/09 (火) 01:43:19 - おお
カラムでのtotalRNAの精製では、カラムの性質上100bあたり以下はカラムをすり抜けて、精製出来ません。5sがみえないのはそのためと思われます。一度そのカラムの仕様を確認ください。

RNAの電気泳動 バンドの本数 削除/引用
No.12067-1 - 2024/01/08 (月) 21:42:54 - りんご
いつもお世話になっております。

Total RNAを抽出した後に品質チェックのために電気泳動にかけています。

以前まではトリゾールとクロロホルムを用いた方法で抽出をしており、その際にはバンドが28Sと18Sと5Sリボソームの3本見えていました。

一方で、現在は時短のためにカラムを用いた方法で抽出をしており、バンドは28Sと18Sの2本見えています。

文献によっても、2本の泳動画像と3本の泳動画像が存在していますが、これはつまり、見えるバンドが2本でもRNAの抽出が上手くいっていると考えて大丈夫ですか?

5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。