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(無題) 削除/引用 No.12064-6 - 2024/01/07 (日) 23:21:32 - っっっっっ 程分子量タンパク質のために、0.2マイクロメートルのPVDF膜が売ってるのでそれ使うと良い。

(無題) 削除/引用 No.12064-5 - 2024/01/07 (日) 18:09:05 - 独り言 トランスファーバッファーのメタノールが10％であれば、20％にする。 SDSが入っているなら、SDSのないトランスファーバッファーにする。 トランスファーの時間を30分程度にする。 それでも改善しなければ、低分子量のメンブレンを購入してみる。ウェットトランスファーを使用してみるとかですかね。

(無題) 削除/引用 No.12064-4 - 2024/01/07 (日) 16:31:39 - おお Transfer後に膜を一度乾かすとか、０。１％ぐらいの薄いPFAとかで固定するとその後外れにくくなるという話もあります。

(無題) 削除/引用 No.12064-3 - 2024/01/07 (日) 13:06:33 - あの 低分子量のウエスタンブロットについては、過去スレにもあるけれども バンドサイズが不正確というか予測と違って　さらに定量性も怪しいようです。 そのためEiaとかも検討した方が良いです。

(無題) 削除/引用 No.12064-2 - 2024/01/07 (日) 08:33:32 - おお PVDFでなければPVDFにしてみるのも手です。NCでやるにしろポアサイズが0.2umの高密度のものを使ってないならそちらに変更するのも手かもしれません。さらに小さい0.1um のものもうってます(支持体がなく折れると割れてしまいますが、支持体があるものもあるかもしれません)。同じサイズでも厚さが違うせいか光が透けているようなものもありますので、単位面積あたりの吸着量をカタログなどで確認しても良いかもしれません。 時間は短くしてもいいです。それはその他の見たい物が移るかどうかもありますが、一つの工夫ではあります。低分子専用にして同時に見たい高分子は別のゲルで検出しても良いかもしれません。 その他はメタノール濃度を上げる。メタノール入りトランスファーバッファーに転写前に数分つけて置いて余分なsdsを除く(多分ゲルも縮んでタイトになる)。 ところですり抜けているとする根拠は何ですか？

低分子量タンパク質の転写 削除/引用 No.12064-1 - 2024/01/07 (日) 08:07:21 - Y お知恵をいただきたいです。 当方、10 kDaのタンパク質をウエスタンにて検出したいのですが、セミドライで15V,１時間の転写ではとうもすり抜けてしまっているようです。 時間を減らしたり、他に工夫点はありますでしょうか？ 例えば、10分や5分に短くすることは第一選択になりますでしょうか？

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