BioTechnicalフォーラム [Promega精製ミニカラム単品について]

Promega精製ミニカラム単品について

No.12032-TOPIC - 2023/12/23 (土) 17:33:15 - Promega

お世話になります。

数mlの大腸菌培養液をP1, P2, P3処理したサンプルや、アガロースゲルを溶解したサンプルからのDNA精製の際にPromega clubで購入した精製ミニカラムを使用しはじめました。

これまでにはQiagenのゲル抽出スピンカラムを使用していました。ゲル溶解bufferで洗浄bufferはQiagenキットの残りを使用しています。

さて、単刀直入にいいますと欲しいDNAが得られていないようです。

やはりQiagenの時に私がしていたように、
ミニプレップ用のスピンカラムキットと、ゲル抽用のスピンカラムキットを購入してそれぞれのスピンカラムを使うのが一番安全ということになりますでしょうか？

大変恐縮ですがご教示いただけましたら幸いです。
また私の使い方に誤りが御座いましたら、併せてご指摘いただけましたら有り難いです。
よろしくお願いいたします。
　

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(無題)

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No.12032-3 - 2023/12/23 (土) 22:03:16 - SYBR master

20年近くPromegaさんとこの精製カラム使用しています。

>[Re:1] Promegaさんは書きました :
> 数mlの大腸菌培養液をP1, P2, P3処理したサンプルや、アガロースゲルを溶解したサンプルからのDNA精製の際にPromega clubで購入した精製ミニカラムを使用しはじめました。
>
> これまでにはQiagenのゲル抽出スピンカラムを使用していました。ゲル溶解bufferで洗浄bufferはQiagenキットの残りを使用しています。
>
> さて、単刀直入にいいますと欲しいDNAが得られていないようです。

これは、ゲルからの回収でしょうか？それともplasmid?
Promega の製品に関しては、全部のbuffer組成開示しているので、その通りに使用すれば、キットと同じ成果を得られています。最近私事ですが、ゲルからの回収率が悪かったのは、アガロースをめっちゃ安い物に変えたため、プロトコールの温度では上手く溶解できていなかったようです(ちょっと高めの低融点ゲルに変えたら元に戻った）。ちなみに、plasmidとRNAの精製に関しては、カラム単体で購入しても問題があったとの認識には成っていないです。

試薬を流用するのは、基本的にNGだと思っています。plasmid抽出系は多分どれでも同じだと思うけど、それ以外は微妙に組成が違うようなので(例えばNBEのMonarchは、protocolが違うので明らかに違うと思う）、精製カラムのシリカメンブレンの特性(表面の修飾らしいですが）に依存していると思います。

また、「精製ミニカラム」を使用しているとのことですが、これは溶出液量を削減できるやつですか？ここら辺は、カラムに吸着できる量を超えると、急激に回収量悪くなります。

> やはりQiagenの時に私がしていたように、
> ミニプレップ用のスピンカラムキットと、ゲル抽用のスピンカラムキットを購入してそれぞれのスピンカラムを使うのが一番安全ということになりますでしょうか？

安全かどうかはよく解りません。カラム単品で購入すると言うことは、本来そのキットの内容を全部理解して使用していると言うことなので、成否は全部自己責任です。しかし、キットを買う場合では、その結果をユーザーからフィードバックされてくる事まで含めて、キットだと思っています(なので「くそ」みたいな回答しかしないTakaraから販売されている、マッハライナーゲル製品は大嫌いです♡全部、Takaraが悪いんですけど）ので、不安残るならキットを購入した方が良いんでは無いでしょうか。

(無題)

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No.12032-2 - 2023/12/23 (土) 20:56:17 - おお

各メーカーそれぞれ工夫があるようで、シリカの素材も違うところがあり、バッファーもそれに最適化してるようで、違うメーカーの組み合わせでうまくいかなかったりと言うことはあるようです。そんな話がここで昔されていたと思います。

Promega精製ミニカラム単品について

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No.12032-1 - 2023/12/23 (土) 17:33:15 - Promega

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