Bio Technical フォーラム

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エピトープタグの トピック削除
No.12029-TOPIC - 2023/12/22 (金) 16:01:21 - くどう
 HAタグ
 
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(無題) 削除/引用
No.12029-9 - 2023/12/26 (火) 07:49:35 - おお
他の可能性としては、過剰発現のためにプロセッシングが進まないとか。

(無題) 削除/引用
No.12029-8 - 2023/12/25 (月) 19:50:33 - あな
タグの分だけ大きくなってる?

(無題) 削除/引用
No.12029-7 - 2023/12/23 (土) 21:00:10 - おお
エンドのタンパク質より非常に強く発現しているので、そのタンパクの抗体ではHAタグしたタンパク質のシグナルが若干したのエンドのシグナルとかぶって単独のバンドに見えているとか。

(無題) 削除/引用
No.12029-6 - 2023/12/22 (金) 21:22:27 - U
かならず確認のためにHA-tag protein 発現させた細胞のライセートとさせていない細胞のライセートを検体としてImmunoblottingで比較していると思うのですが、どのような違いがありますか。

(無題) 削除/引用
No.12029-5 - 2023/12/22 (金) 18:21:11 - 774R
稀に、末端に反応する抗体だった場合、タグをつけると反応しなくなる場合があります。その結果、

・HA抗体では(当然だが)発現させたタンパク質だけが検出される。
・タンパク質に対する抗体は内因性のタンパク質だけが検出される。

まぁ、可能性の1つ程度の話です。

(無題) 削除/引用
No.12029-4 - 2023/12/22 (金) 17:28:12 - おお
そのタンパクに対する抗体がHAタグのバンドを認識せず、5kDa小さいエンドのタンパク質だけが検出されるならちょっと変ですね。

タグがついた場合少し大きいところに来ることはよくあります、その差は必ずしもHAの計算上の大きさとは限らない。

(無題) 削除/引用
No.12029-3 - 2023/12/22 (金) 16:15:03 - 774
エンドのタンパクを見てるとか?

エピトープタグのWB 削除/引用
No.12029-2 - 2023/12/22 (金) 16:04:13 - くどう
 HAタグを付加したあるタンパクを細胞に発現させ、WBで発現を評価しているのですが、そのタンパクに対する抗体とHAタグに対する抗体で、バンドの位置が微妙に(5kD分くらい)違うのですが、このようなことはあり得ますか?

エピトープタグの 削除/引用
No.12029-1 - 2023/12/22 (金) 16:01:21 - くどう
 HAタグ

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