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(無題) 削除/引用 No.1202-7 - 2012/12/01 (土) 03:33:27 - おお スタッキングゲルにイミダゾールがはいったものをつかってるようですね。その辺は考慮されていますでしょうか?

(無題) 削除/引用 No.1202-6 - 2012/11/30 (金) 16:46:19 - AP 当該文献にはイミダゾール塩酸塩（imidazole-HCL)とあります。 それをフリーの（free baseの）imidazoleに変えてしまったら、そういうことが起こるかもしれません（カチオン過剰？　カウンターイオン不足？　あるいはサンプルpHの上昇？）。

(無題) 削除/引用 No.1202-3 - 2012/11/30 (金) 15:36:36 - ヤマダ 説明が不足していました． サンプル1のタンパクはN末端が修飾されているため，内部配列を読むために開裂操作を行っています． サンプル1は普段ラボで使用しているsample bufferでタンパクを変性処理， サンプル2はそのsample bufferとは異なる組成のsample buffer（含イミダゾール）でサンプル1と同じタンパクを変性処理したものです． 参考文献として Judith Rittenhouse and Frank Marcus. 1983. Peptide Mapping by Polyacrylamide Gel Electrophoresis after Cleavage at Aspartyl-Prolyl Peptide Bonds in Sodium Dodecyl Sulfate-Containing Buffers. ANALYTICAL BIOCHEMISTRY 138,442-448　を参考にしました．

(無題) 削除/引用 No.1202-2 - 2012/11/30 (金) 14:50:19 - おお >[Re:1] ヤマダさんは書きました : > SDS-PAGEにおいて， > 1.分子量マーカー > 2.サンプル1 > 3.サンプル2（サンプル1を開裂処理したもの） > をそれぞれレーンごとに流して染色し，泳動結果を確認したところ，サンプル2のみ明らかに薄いバンドが得られました． > サンプル2を流したウェルの底が染色されていたことから泳動されていなかったと判断したのですが，どういった原因でこの現象が起こるのでしょうか？ > > 開裂処理ってなんですか?サンプルバッファーをいれてへんせいさせたということですか。。。 そうすると、2のサンプルはサンプルバッファーが入ってないのですか?いれても変性処理しなかったということですか? 完全にへんせいさせてないたんぱくしつは、SDSが十分にタンパク質にくっついてなく、移動度が遅くなるタンパクが出てくる可能性があります。また巨大な蛋白コンプレックスが十分解離してない可能性もあります。とくに中間径フィラメントとか比較的安定そうです。 2の目的はなんですか。

SDS-PAGEでサンプルが流れない 削除/引用 No.1202-1 - 2012/11/30 (金) 13:21:49 - ヤマダ SDS-PAGEにおいて， 1.分子量マーカー 2.サンプル1 3.サンプル2（サンプル1を開裂処理したもの） をそれぞれレーンごとに流して染色し，泳動結果を確認したところ，サンプル2のみ明らかに薄いバンドが得られました． サンプル2を流したウェルの底が染色されていたことから泳動されていなかったと判断したのですが，どういった原因でこの現象が起こるのでしょうか？

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