BioTechnicalフォーラム [フローサイトメトリーのコンペンセーション]

フローサイトメトリーのコンペンセーション

No.12012-TOPIC - 2023/12/15 (金) 11:20:41 - EDC

mCherryを発現する細胞の表面抗原を3種類解析する予定です。

APCとFITCとPerCP-cy5.5の3種類で標識して、解析しています。これらはpanel builderを使って、励起光と蛍光のオーバーラップがないように選んでいます。

APCのシグナルに関しては、アイソタイプコントロールが10^3前後に集積するのに対して、目的の抗原は10^6に集積して、はっきりと分離しています。

その一方で、残りの2つの抗原に関しては(つまりPerCP-cy5.5とFITC)、10^4と10^5に集積して、分離はしているものの若干のオーバーラップがあります。

この状況で、後者2つの分離能を上げたいとして、補正をどのように行ったらいいのかわからないのですが、何かアドバイスを頂けないでしょうか。
　

- このトピックにメッセージを投稿する -

全9件 ( 1 ～ 9 )　前 | 次　1/ 1. /1

(無題)

削除/引用

No.12012-9 - 2024/01/18 (木) 12:17:34 - ポスドク

追加ですが、もしご自分で補正作業ができるのであれば、無染色、シングルステイン×2(PerCP-cy5.5とFITCの各々単染色のみ)、ダブルステインのサンプルを用意して、それぞれをFACSにかけて、右上を第一象限として反時計回り、X軸をその抗体の蛍光の値をとったときに、無染色で検出されず、シングルステインで第4象限（シングルポジティブ）にのみサンプルが検出されるように、その抗体の検出に該当するレーザーのパラメータ（gainとか）をいじって、最後にそのコンペンセーション値を使ってダブルステインサンプルを測定して、第一象限（ダブルポジティブ）でサンプルが検出できることを確認します。
この方法は、おそらくマニュアルにも載ってると思います。

(無題)

削除/引用

No.12012-8 - 2024/01/18 (木) 11:33:57 - ポスドク

一番手っ取り早くて簡単なのは、FACSのメーカーの技術サポートに連絡して聞いてみる、です。
機器によってクセ（傾向）がありますし、それを熟知していく人に聞くのが一番おすすめです。あちらも大事な商売相手ですから、今後のことを考えて懇切丁寧に教えてくれるはずです。ちなみに、アドバイス程度なら無料です。

(無題)

削除/引用

No.12012-7 - 2023/12/17 (日) 17:00:08 - おお

そんな事だろうと静観してました。

(無題)

削除/引用

No.12012-6 - 2023/12/17 (日) 14:33:32 - み

>[Re:5] みさんは書きました :
> 詳しくないなら、口を出さない。

偶然か知らんけど他の人と同じハンネでこのようなコメントしないでいただきたい。
偶然被ったとか専売特許もないし自由だと主張されるのも見えていますが。