Bio Technical フォーラム

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リアルタイムの信用性 トピック削除
No.12002-TOPIC - 2023/12/12 (火) 00:21:38 - リアルタイム
リアルタイムPCRで遺伝子XのスプライズバリアントA,B,Cを定量して、ある変異体では全部2倍以上上がっていたとします。PCRのシグモイドは30サイクルくらいから立ち上がり、インターナルコントロールも含めて解離曲線も綺麗だとします。綺麗な結果だと思いますが、一般的にはこの結果をコンファームするためにプライマーの位置をずらしてやってみるなどの追加実験が必要でしょうか。
　
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(無題) 削除/引用
No.12002-2 - 2023/12/12 (火) 03:14:09 - おお
スプライシングバリアントを３つ見てすべて同じように上がっているなら、３箇所調べて同じ結果とも言えるのでいいかなと思います。

RT-qPCRの結果のバリデーションでRNAを見る他の方法を使っているのは見たことがありません。強いて言えばノーザンブロットとかだけど、今はそれ自体ほとんどされていませんね。

実験の目的に沿っているならタンパクを見るというのはありかと（ただ間に色々とレギュレーションがかんでいる可能性は否定できませんが）。

リアルタイムの信用性 削除/引用
No.12002-1 - 2023/12/12 (火) 00:21:38 - リアルタイム
リアルタイムPCRで遺伝子XのスプライズバリアントA,B,Cを定量して、ある変異体では全部2倍以上上がっていたとします。PCRのシグモイドは30サイクルくらいから立ち上がり、インターナルコントロールも含めて解離曲線も綺麗だとします。綺麗な結果だと思いますが、一般的にはこの結果をコンファームするためにプライマーの位置をずらしてやってみるなどの追加実験が必要でしょうか。
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