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オイルレッドOの析出? トピック削除
No.11987-TOPIC - 2023/12/08 (金) 12:36:17 - 染色
マウス肝臓をオイルレッドOで染色したいと考えています。
武藤化学のオイルレッドOを使用して推奨通り染色したのですが、観察時にオイルレッドOが全体に析出していました。
論文にある様な染まり方ではなかったので析出と考えていますが、オイルレッドO染色がうまくいく基本的なコツなどはあるのでしょうか?

プロトコールは以下になります。
凍結切片を流水水洗で15分
60%イソプロピルアルコールで1分
濾過済みの60%オイルレッドOで15分(37℃)
60%イソプロピルアルコールで1分
流水水洗で5分
ヘマトキシリンで10分
流水水洗で10分
封入

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よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.11987-4 - 2023/12/08 (金) 13:21:09 - G25
>私の手では、ORO/60% TEPで染色したのち、60% TEPでdestainig/differentiationするのが良い結果でした。

iPrOH溶媒のときと同様3:2で水を加えるので36% TEPでした。

(無題) 削除/引用
No.11987-3 - 2023/12/08 (金) 13:08:21 - G25
>OROの濃度と溶媒は?
市販品でしたね。iPrOH溶媒の原液。
もちろん使用時に3:2で加水してますよね。

その市販品を使う限り、
結晶を除去するのはやはり染色後のdestainig/differentiationが肝でしょうね。

(無題) 削除/引用
No.11987-2 - 2023/12/08 (金) 13:00:44 - G25
OROの濃度と溶媒は?

60% iPROHで1分のdestainig/differentiation は時間で区切るのではなく目視で適当なところで止めたらどうでしょうか。

なおOROの溶媒にはポピュラーなiPrOHのほかに、60% Triethylphosphate (TEP)を用いる方法とpropyleneglycolを使う方法などがあります。
私の手では、ORO/60% TEPで染色したのち、60% TEPでdestainig/differentiationするのが良い結果でした。

https://link.springer.com/article/10.1007/s004180100297

オイルレッドOの析出? 削除/引用
No.11987-1 - 2023/12/08 (金) 12:36:17 - 染色
マウス肝臓をオイルレッドOで染色したいと考えています。
武藤化学のオイルレッドOを使用して推奨通り染色したのですが、観察時にオイルレッドOが全体に析出していました。
論文にある様な染まり方ではなかったので析出と考えていますが、オイルレッドO染色がうまくいく基本的なコツなどはあるのでしょうか?

プロトコールは以下になります。
凍結切片を流水水洗で15分
60%イソプロピルアルコールで1分
濾過済みの60%オイルレッドOで15分(37℃)
60%イソプロピルアルコールで1分
流水水洗で5分
ヘマトキシリンで10分
流水水洗で10分
封入

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