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(無題) 削除/引用 No.11980-9 - 2023/12/09 (土) 05:03:15 - おお >塩基であるTriと酸であるGlyが共存する場合、それぞれ単独の溶解度からだけでは濃度をどこまで上がられるかは予想つきません。 それはわかってるんですけどね。。。最低限どれくらいは溶けるかというのもありますし、、、予想できないから躊躇しているという話でもあるわけで。 >Tris-Gly バッファは分量の粉を溶かすだけで塩酸などでpHしてはいけない、pHがおかしいときは作り直せってことになっていますね。 存じ上げてますけどね。というか一般的な話としてでしょうか。ん、３MのTrisはpHを９以下にしないと溶けないっていったからですかね。 確かに学生でpH合わせて発熱してBPBが黄色になっているやつがいました。

(無題) 削除/引用 No.11980-8 - 2023/12/08 (金) 12:34:53 - G25 Trisは弱塩基だから酸と共存すると電離度が上がって溶解度は上がる。 Glyは弱酸だから塩基と共存すると電離度が上がって溶解度が上がる。 塩基であるTriと酸であるGlyが共存する場合、それぞれ単独の溶解度からだけでは濃度をどこまで上がられるかは予想つきません。 pKaやら電離度やらから計算できるのかもしれないけど、私は不得手。 ちなみに、 Tris-Gly バッファは分量の粉を溶かすだけで塩酸などでpHしてはいけない、pHがおかしいときは作り直せってことになっていますね。 過去に初心者がTAEやTris-Glyを塩酸などでpHしていたという事故がありましたが、移動度がおかしいやら異常に発熱するやら泳動中にpHがおかしくなってBPBが黄色っぽくなるやら、変なことがおこった記憶があります。

(無題) 削除/引用 No.11980-7 - 2023/12/08 (金) 03:08:16 - おお >[Re:4] あのさんは書きました : > 単純に考えると、トリス（550 g/l 25 °C）とグリシン（250 g/l 25 °C）の溶解度とそれぞれの分子量から、最高限度の推定をできそうですけど。 あー確かに溶解度を把握するのは考えるべきでしたね。 Tris（Base)はそのままでは３Mは溶かせません。HClでpHを９以下にすると大丈夫です。なのでトランスファーバッファーの１００倍の濃さは大丈夫という計算になりますね。 グリシンは、、、だめですね２０Xでは２８８g/lだし、、、多少pHなどで変わるかもしれませんけど、、、

(無題) 削除/引用 No.11980-6 - 2023/12/08 (金) 02:54:31 - おお >[Re:5] G25さんは書きました : > Transfer buffとrunning buffが混線しているようです。 > おおさんはrunningとtransferのベースを同じ組成にしているということでしょうか。 そうです。確かバイオラッドのブロッター関連の商品の説明についてきたプロトコールでやってます。Towbin bufferとか言うのだったと思います。 > > 古典的なLaemmli running buffは10xで > Tris base 0.25 M > Glycine 2.5 M > (+ 1% SDS) > だと思いますが、 ん、これもちょっと私の知っているやつと違うかな、、、グリシンが少し多いような気がする。 > > リンク先の20x transfer buffは20xとは言え、 > Tris base 0.2 M > Glycine 2 M > ですから10x Laemmli running buffより薄いし、 > > 25xは > Tris base 0.3 M > Gly 2.4 M > は10x Laemmli running buffより2割濃いだけ 指摘ありがとうございます。私の目が節穴でした。。。トランスファーとランニングバッファーが一緒という思い込みもあったので、、、ここで回答するときは不思議なこと言っているなぁと思うことも多々あるわけですが、質問するときって意外と見てなかったりするもんなんでしょうかね、、、

(無題) 削除/引用 No.11980-5 - 2023/12/07 (木) 18:42:31 - G25 Transfer buffとrunning buffが混線しているようです。 おおさんはrunningとtransferのベースを同じ組成にしているということでしょうか。 古典的なLaemmli running buffは10xで Tris base 0.25 M Glycine 2.5 M (+ 1% SDS) だと思いますが、 リンク先の20x transfer buffは20xとは言え、 Tris base 0.2 M Glycine 2 M ですから10x Laemmli running buffより薄いし、 25xは Tris base 0.3 M Gly 2.4 M は10x Laemmli running buffより2割濃いだけ

(無題) 削除/引用 No.11980-4 - 2023/12/07 (木) 16:37:40 - あの テクニシャンがいる環境がうらやましいですね。 単純に考えると、トリス（550 g/l 25 °C）とグリシン（250 g/l 25 °C）の溶解度とそれぞれの分子量から、最高限度の推定をできそうですけど。 ただし扱いやすいかどうかは、また別の話のような気もしますが。

(無題) 削除/引用 No.11980-3 - 2023/12/07 (木) 13:29:55 - おお SDSは希釈する際に加えています。というのはWBのトランスファーバッファーも組成が一緒なので。WBのときは１xにするときにメタノールを加えてSDSを加えていません。 ですからSDSがない方が好都合ですし、いま１０xをテクニシャンに作ってもらってますが、SDS抜きで作ってもらってます。ん、SDSを抜くと解けないとかは、、、流石にそれはないか。

(無題) 削除/引用 No.11980-2 - 2023/12/07 (木) 13:10:23 - あの おおさん SDS泳動用なのに、SDS無しのバッファで濃いのですか？？次はSDS無しですが： 25x bioland-sci.com/index.php?main_page=product_info&products_id=823 ちなみに当方では、よっぽど予算不足で困るときなど以外は、SDSを扱うのが面倒くさいので、市販の１０倍のSDS入りバッファで済ませています。　以前はバイオラドでしたけど、円高の今は国産品です。

Tris Glycine Transfer Buffer 削除/引用 No.11980-1 - 2023/12/07 (木) 09:41:31 - おお SDSPAGEで使うTris-glycine buffer （pH８。３）ですけど、１０xStockをよく見かけますが、それより濃いのは作れますか？ と思いつつググりましたが、 ２０x aatbio.com/resources/buffer-preparations-and-recipes/tris-glycine-transfer-buffer-20x これはちょっと組成がちがうかpH８。８になってるし。TransferでpHを高く振って正電荷を潰すってことかな。 25x bioland-sci.com/index.php?main_page=product_info&products_id=823 これはpH８。３で泳動に使う一般的なやつですね。 皆さんどれくらいの濃さでStockを作っているか、また、２０とか２５x、それ以上作った経験ありましたらお伺いしたいです。

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