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(無題) 削除/引用 No.11954-7 - 2023/11/30 (木) 12:04:19 - G25 蛍光の撮像が済んでから、Sypro Rubyなどで全タンパク染色をした撮影像と重ね合わせるというのではだめですか。 蛍光にこだわらなくてもCBBとか（ゲルが縮まないアルコールフリーのレシピもありますよね）。なんならCBBも蛍光撮影できるんだっけか？

(無題) 削除/引用 No.11954-6 - 2023/11/30 (木) 03:13:31 - おお >[Re:5] AAAさんは書きました : > おお様 > > ありがとうございます！施設の装置では先に述べたBlue, Green, Redの蛍光に加えてUV(ex 280nm ,em EtBr)での撮影に対応していました。 それは残念でした。トリプトファンは吸収２８０nmぐらい蛍光は３８０位かと思いますので、EtBr用のフィルターだともしかしたら厳しいかもですね。

(無題) 削除/引用 No.11954-5 - 2023/11/29 (水) 15:20:45 - AAA おお様 ありがとうございます！施設の装置では先に述べたBlue, Green, Redの蛍光に加えてUV(ex 280nm ,em EtBr)での撮影に対応していました。 計算上アルブミンは20μg/laneでそこそこ濃度が高いので、もしかしたらUVで蛍光を見れるかもしれないと思い、撮影してみたのですがアルブミンのバンドは非常に薄いのと、低分子の蛍光も混じってしまうので撮影できませんでした。 ご紹介いただいたこちらのキットなら波長が装置のRedの波長にぴったり合いそうです。 https://www.activemotif.com/catalog/104/albumin-blue-fluorescent-assay-kit . Excitation and Emission Filters We recommend using filters with the following ranges: 540-580 nm Excitation and 600-640 nm Emission.

(無題) 削除/引用 No.11954-4 - 2023/11/29 (水) 02:04:45 - おお biotium.com/product/bovine-serum-albumin-conjugate-cf-dye-conjugates/ www.thermofisher.com/order/catalog/product/A23017?SID=srch-srp-A23017 BSAだと蛍光ラベルしたものがいろいろ売られているようです。 www.abcam.com/products/proteins-peptides/native-human-serum-albumin-protein-rhodamine-ab8031.html 人もあるにはあるね。 www.abcam.com/products/proteins-peptides/recombinant-human-serum-albumin-protein-his-tag-ab217817.html His-tagも売られていてHisTagをIn gel Detectionする方法があるからこの組み合わせでもいいかも。 www.thermofisher.com/us/en/home/references/protocols/proteins-expression-isolation-and-analysis/protein-purification-protocol/detection-of-his-tagged-fusion-proteins-in-gels-using-invision-his-tag-in-gel-stain.html あとビオチン化しアルブミンもあったと思う。

(無題) 削除/引用 No.11954-3 - 2023/11/28 (火) 23:53:39 - おお https://www.activemotif.com/catalog/104/albumin-blue-fluorescent-assay-kit アルブミンを測るけいこうしやくもあるね。

(無題) 削除/引用 No.11954-2 - 2023/11/28 (火) 23:38:59 - おお UV 励起の蛍光染色試薬があるけどそう言うのはどう？非変性で使えるかは知らないけど確認してみてもいいかも。 www.lamdabio.com/products/protein-gel-safestain/ https://biotium.com/technology/protein-detection-and-analysis/one-step-blue-one-step-lumitein-protein-gel-stains/?keyword=sypro%20ruby&creative=500172097164&utm_term=sypro%20ruby&utm_campaign=Protein+Gel+Stains&utm_source=adwords&utm_medium=ppc&hsa_acc=1128015683&hsa_cam=91373533&hsa_grp=4240517173&hsa_ad=500172097164&hsa_src=g&hsa_tgt=kwd-355708809&hsa_kw=sypro%20ruby&hsa_mt=b&hsa_net=adwords&hsa_ver=3&gclid=CjwKCAiAvJarBhA1EiwAGgZl0INWUXZjTxmyWMZUp0SMi-Nb-eo1V0Gsthjwjv_bAMl4UwWZcjNsrRoCwm8QAvD_BwE https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/protein-biology/protein-gel-electrophoresis/protein-gel-staining-imaging/fluorescent-protein-gel-stains.html?gclid=CjwKCAiAvJarBhA1EiwAGgZl0NUiW0pJOvOx51Lrrgk0hVJqJBCom8nbof_VRIiozD6xoAKWC7oV6hoCid8QAvD_BwE&ef_id=CjwKCAiAvJarBhA1EiwAGgZl0NUiW0pJOvOx51Lrrgk0hVJqJBCom8nbof_VRIiozD6xoAKWC7oV6hoCid8QAvD_BwE:G:s&s_kwcid=AL!3652!3!671261109500!e!!g!!sypro%20ruby%20protein%20blot%20stain!18254528116!149945299342&cid=bid_pca_wws_r01_co_cp1359_pjt0000_bid00000_0se_gaw_bt_pur_con&gad_source=1 ん、これでとべるかな？ あと、タンパクのトリプトファンが蛍光持ってるから、量によってはUV励起で観れるはず。

Clear Native PAGEのタンパク質の赤色蛍光染色 削除/引用 No.11954-1 - 2023/11/28 (火) 18:27:48 - AAA いつも勉強させてもらっています。 以前Clear Native PAGEについて質問させていただきました。 以前の質問の際とは少々状況が変わっております。 ex/em 500/600nm程度の蛍光をもつ低分子と、ヒト血清アルブミンで複合体を作らせてClear Native PAGEで非変性ゲルに泳動して、撮影しようと考えております。 アルブミンと結合状態の低分子は蛍光でバンドが撮影できそうなので、それに重ねてヒト血清アルブミンのバンドも撮影したいと考えております。 Blue Native PAGEだとCBBが吸光して、低分子の蛍光が減弱してしまわないかなと心配しています。 別の蛍光色で染色したいと考えております。 施設の発光/蛍光で撮影できるゲル撮影装置だと、 Blueex460em Cy2(506) Greenex520em Cy3(570) Redex630em Cy5(670) 低分子の蛍光はGreenで最も強く、Blueではわずかに光ります。 消去法で、Redの波長で蛍光とらえられる染色法を探しております。 今回流すのは精製されたヒト血清アルブミンと低分子だけですので、ヒト血清アルブミン特異的に染色する抗体などでなくて、タンパク質を非特異的に染色して、ゲルを直接撮影するのがベストと考えています。 何か良い方法はありますでしょうか。 ご教示ください。

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