全9件 ( 1 〜 9 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.11900-9 - 2023/11/10 (金) 09:35:33 - toto たぶんFRETを使うのが簡単で高感度じゃないですかね。蛍光基Aにペプチドを繋いで、もう片方に他の波長の蛍光基B、あるいはクエンチャーB'を繋いでおくと、ペプチドが切れたら、Bの蛍光か、クエンチャーの場合はAの蛍光が出るようになるという感じです。こんな例がありました。 www.nature.com/articles/s41598-020-67578-2 他にもいろいろあります。クエンチャーのほうが検出には使いやすいです。

(無題) 削除/引用 No.11900-8 - 2023/11/08 (水) 01:02:31 - おお 非リン酸化も認識するErk1/2に対する抗体でそのバンドは検出されますか？もし検出されないなら、いったんはキャラクタライズされてない（たぶんノンスぺ）としておくのがスムーズかもしれません。 もちろん探求心は研究の基本ですから、いろいろ追求するのは悪いことではありません。そのうえで、まず再現性、それからErk1/2のKDなどでそのバンドが見られるのか見られないのか、そのリン酸化ERK抗体のエピトープ部分の配列とERKファミリーの相当する部分とどれぐらい相同性があるのかなど、やれることはあると思います。 実際にその抗体を使った人からコメントがあるとよりいいですが。

(無題) 削除/引用 No.11900-7 - 2023/11/07 (火) 18:21:27 - ち とりあえず1次抗体のステップとばして２次抗体だけで反応させてみて、５０KDaのバンドがでるかどうかみてほしい。とりあえず話はそれからとおもう。

(無題) 削除/引用 No.11900-6 - 2023/11/07 (火) 12:23:55 - MBC 追加で、使用した二次抗体は Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody #7074です

(無題) 削除/引用 No.11900-5 - 2023/11/07 (火) 12:21:25 - MBC 皆様コメントありがとうございます。 泳動したサンプルはC57BL/6マウス野生型のBMDMです。 使用した一次抗体は Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Antibody #9101です。 これらの情報だけで質問してしまい申し訳ありません。

(無題) 削除/引用 No.11900-4 - 2023/11/07 (火) 12:21:03 - おお どこの抗体かというのも重要な情報だと思いますが、、、 この抗体は、＊＊ｋDaあたりにノンスぺが出るとかいうこともあるので（抗体が違えば解釈が変わるので違う抗体を同じ土俵話しても意味がない）。 意味がないかもしれませんがそれでも書き加えると、 ERKファミリーを検出している可能性はあるのかもしれません。BDのモノクロ、Anti-ERK (pan ERK) Mouseでは５０強のあたりにバンドが出るそうです。 DOI:10.1523/JNEUROSCI.20-05-01849.2000 DOI: 10.1074/jbc.272.43.26815 ＞IgGの可能性も考えたのですが25kDa付近にバンドは検出されなかったため異なるものであると考えています。 Heavy chainを認識するようなものであれば抗体は認識できても、25kDaには反応しませんけど。

(無題) 削除/引用 No.11900-3 - 2023/11/07 (火) 12:06:21 - asan その情報だけでは可能性が無数にあるのでなんとも言えません。 「ERK1/2のリン酸化抗体」でしたら、世の中でCSTのものなど広く使用されてるものはあるので、crossreactするようなバンドがあれば情報として探せばいくらでも出てきそうです。pan-ERK抗体だとERK1/2以外にもERK2-5とかバリアントなどでバンドが複数あっても良さそうですが一般的にはERK1/2がもっともメジャーなので強く出ると思います。 また、WBのバンドサイズのマーカーは結構不正確なものもあるので10 kDa前後ならずれることも多いです。特に色付きマーカーはそのぐらいの差なら信用しすぎるのもどうかって話もあります。

(無題) 削除/引用 No.11900-2 - 2023/11/07 (火) 11:47:15 - 774R 泳動したサンプルは？

ウエスタンブロットで約50~60kDaでバンド検出されるもの 削除/引用 No.11900-1 - 2023/11/07 (火) 11:13:36 - MBC 先日、ERK活性を確認する目的でウエスタンブロットを行ったのですが ERKのバンドと考えられる40〜45kDa付近以外に50〜60kDaあたりに別のバンドが確認されました。これは何のバンドと考えられるのか有識者にいくつか挙げていただきたいのです。 使用した二次抗体はanti-ラビットIgGであったため、IgGの可能性も考えたのですが25kDa付近にバンドは検出されなかったため異なるものであると考えています。 拙い文章で申し訳ございませんがどうかよろしくお願いいたします。

全9件 ( 1 〜 9 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---