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(無題) 削除/引用 No.11898-6 - 2023/11/07 (火) 18:26:07 - G25 念のため、繰り返すと、 世に出回っているanti-BrdUはmonoclonalだけだと思うので、この場合、 polyclonalの場合のように前吸収効果で交差反応する抗体種が除去されたからというのはあたらないでしょう。 抗体の結合は特異的な標的と非特異的な標的で解離係数が桁違いであるものです。抗体濃度を薄くしても特異的な結合はあまり落ちずに非特異的な結合から落ちていくので、S/Nが良くなるものです。

(無題) 削除/引用 No.11898-5 - 2023/11/07 (火) 15:44:59 - とん みなさまありがとうございました！ シグナル自体は弱くなっているかもしれないが相対的に見やすくなるというお話とても納得がいきました！本当にありがとうございます！

(無題) 削除/引用 No.11898-4 - 2023/11/07 (火) 02:38:32 - おお pre-absorptionですね。 Westernでもノンスぺが目立つ場合は有効です。弱くなるということも多いですが、特異的なバンドは相対的に強くなってたりします。 組織免疫染色でも弱くなっているかもしれませんよ、特異性が上がったので気が付かないだけで。

(無題) 削除/引用 No.11898-3 - 2023/11/06 (月) 21:42:30 - 774 過剰な抗体がなくなってノンスぺが減る、的なイメージです。

(無題) 削除/引用 No.11898-2 - 2023/11/06 (月) 21:13:22 - G25 ポリクロの場合、前吸収 pre-absorptionがかかって、非特異的反応をする抗体種が除去されるから。 Mabの場合はあまり関係ないけど、一回目より二回目の方が抗体濃度が下がるために、染まりが綺麗になるってことはある。抗体染色に限らず、染物は濃度を薄くした方が(その分必要に応じて時間を伸ばす)バックが下がってS/Nの良い染色が得られる。最初っから希釈薄めにすればいいだけだけど。

一次抗体再利用で発色よくなる？ 削除/引用 No.11898-1 - 2023/11/06 (月) 18:10:39 - とん マウス脳切片をBrdU免疫染色する際、一度使用した一次抗体を再利用すると二回目に使用したときに、シグナルが一回目に比べて綺麗に出るという話を聞きました。 ウエスタンブロットで再利用した際はむしろバンドが見にくくなったように感じたのですが、なぜそのような違いが起こるのでしょうか。 博識な方、教えてください！

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