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(無題) 削除/引用 No.11896-11 - 2023/11/09 (木) 15:09:44 - ううう 神経幹細胞はディッシュをコーティングしないとスフェア作ってました。

(無題) 削除/引用 No.11896-10 - 2023/11/09 (木) 02:29:25 - おお >個細胞化した状態で増えてくれるcell lineを作成したいと考えています。 ちなみにその理由をうかがってもよろしいでしょうか。少し違った角度のSuggestionもしたつもりですけど、それでは都合が悪いのかスルーされているようですので。 それとも、上からそういう指示が出てるとか？ 細胞同士の接着にはそのメカニズムがありますから、そこから逸脱した性質をもつ細胞を得ることになります。逆にそれを利用するなら悪性化に伴いメタロプロテアーゼが活性化するとかありますから、がん遺伝子を入れて悪性化させるとかそんなこともあり得るのかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.11896-9 - 2023/11/08 (水) 20:57:23 - TE 初めからヘテロな集団ならともなく、１回２回のフィルトレーションやクローニングではなんともならないと思いますよ。先に書いたディシュに接着する細胞株を浮遊性に変えた場合も、１回ゆるくくっついている細胞を集めても、次回はほとんどはしっかりくっついています。根気よく毎日ディシュ移しを３ヶ月したとして約100回、その後やっと浮いている状態の細胞が増えてきてそこでlimiting dilutionをして安定浮遊クローンをピックアップしました。これも本当に望みの性質が出るかはやってみないとわからないもので、見通しのない運任せです。

(無題) 削除/引用 No.11896-8 - 2023/11/08 (水) 12:56:33 - いいだ 1-10時間もすれば、浮遊性細胞も自己集合化することが分かっています。 ワイドポアのピペット操作でゆっくりとcell strainerにかけることで選別できますかね。 strainerにかける以外にいい方法ありますか。 シングルセル化してみたのですが、基本的には、アグリます。もっと多数の細胞をスクリーニングしたらいいのかもしれませんが、まずは、single cell化するための細胞をstrainerにかけて、選別したいです。

(無題) 削除/引用 No.11896-7 - 2023/11/07 (火) 21:00:00 - TE 塊を作る場合とは異なりますが、２つの血球系細胞株で、ディシュにくっついてピペッティングだけでの回収が面倒なものを、軽いピペッティングではがれるもの、次第にゆするだけでがれるものと選択バイアスをかけていき、最後にシングルクローン化して、完全浮遊するものにすることができた経験があります。ただし、すべてのステップをやり遂げるのにどちらも数ヶ月かかったと記憶しています。

(無題) 削除/引用 No.11896-6 - 2023/11/07 (火) 20:50:44 - TE 投稿者さんの細胞に当てはまるかはわかりませんが、とある浮遊細胞株でFBS培地だと桑実状の塊をつくるけど、市販のserum-free培地だとかなり単独で存在するようになるものがありました。

(無題) 削除/引用 No.11896-5 - 2023/11/07 (火) 19:27:56 - G25 まったくの好みの問題。 確立という言葉もそういう意味で世の中で普通に使われている。 どちらもestablishに対する訳語のバリエーションに過ぎない。 わざわざしゃしゃって言うほどのことじゃなかろう。

(無題) 削除/引用 No.11896-4 - 2023/11/07 (火) 18:45:46 - R％％＾＆＊（ cell line ならば”確立”じゃなくて”樹立”とおもう。

(無題) 削除/引用 No.11896-3 - 2023/11/05 (日) 19:24:31 - おお 浮遊系でシングルセルで浮遊している細胞を培養した事はありますけどね。大概というのは感覚と経験によるものでしょうから、それは否定できませんけど。 質問に関してはどうかなぁ、、、なんとも言えない。加えてセレクションする訳だから、特殊な細胞だけを選んできた状態で元々の細胞の性質から逸脱してる可能性をどう考えるのか。 違うやり方としては、シングルセルに分散した懸濁液から、96wellとかでclonal expansion させてそういう性質のものを見つけるか。これも上記の懸念はつきまとう。 よくわからんのだけど、必要時にピペッティングでシングルセルに分散させればいいだけでないの？

(無題) 削除/引用 No.11896-2 - 2023/11/05 (日) 17:10:56 - み 浮遊系で培養すれば大概細胞塊を形成すると思います。 細胞種の問題ではなく培養方法の問題では？

ある特殊な培養細胞の確立 削除/引用 No.11896-1 - 2023/11/05 (日) 16:52:42 - いいだ ある患者由来の浮遊性細胞株を扱っているのですが、細胞が塊を作ります。 様々な実験に使いたいので、できれば、個細胞化した状態で増えてくれるcell lineを作成したいと考えています。 30umのストレイナーで10世代ほどセレクションをかけたりすれば、そういった特徴を持つcell lineを確立することは可能でしょうか。

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