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(無題) 削除/引用 No.11893-6 - 2023/11/09 (木) 09:10:10 - 774R ＞（私はアガロースに結合させてから制限酵素加えてます） 制限酵素？？？

(無題) 削除/引用 No.11893-5 - 2023/11/09 (木) 09:06:24 - さく BL21で発現させてS-S結合がかかってるかどうかの方が…。

(無題) 削除/引用 No.11893-4 - 2023/11/08 (水) 10:09:17 - ああ まだ見てるかわかりませんが。。。 つまりは還元型グルタチオンによるGST溶出をタンパク質の変性（S-S還元など）によるものと考えているということですかね？ それでしたら還元型グルタチオン(GSH)はS-S結合を切れるほどの還元力は持ちませんし、そもそもGST溶出はでGST tagがビーズのGSHとbuffer中のGSHで結合の競合を利用した手法なので懸念しているようなことは起こらないです。 なのでちゃんとそのやり方で回収できると思います。 （私はアガロースに結合させてから制限酵素加えてます）

(無題) 削除/引用 No.11893-3 - 2023/11/04 (土) 10:57:34 - 774R 質問を読んでもいまいち理解できないのですが、もしかして質問者は還元型グルタチオンでS-S結合が切断されると考えてるということですか？

(無題) 削除/引用 No.11893-2 - 2023/11/04 (土) 04:37:39 - おお https://www.gbiosciences.com/Protein-Research/Glutathione-Resin >S＝S結合 結合様式的にはS-Sですけどね。

還元剤抜きでのGST精製は可能でしょうか 削除/引用 No.11893-1 - 2023/11/04 (土) 01:31:10 - 春 よろしくお願いします。 S＝S結合を持つタンパク質をGST融合としてBL21に発現させ、FXaで切断後にS＝S結合を持つタンパク質のみを得たいです。そのために、切断後にグルタチオンアガロースにてGSTおよび未消化の物を除けられたらと思っています。つまりグルタチオンアガロースに結合しなかった分画に欲しいタンパク質がくるはず。 この時に一つ質問があります。グルタチオンアガロースには還元型グルタチオンが固相化されている？のか、その担体と切断産物を混ぜることで、還元型グルタチオンを使って溶出するという操作がなくても、S=S結合が切られてしまうような可能性はないでしょうか？ 理想は、FXaで切断後にグルタチオンアガロースを加え、それに結合しなかった分画がS=S結合を持った欲しいタンパク質となればいいのですが、そうなりますでしょうか？ 初めてのことで経験者の方のご意見お聞きしたいです。 よろしくお願いします。

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