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(無題) 削除/引用 No.11866-3 - 2023/10/21 (土) 23:00:37 - Karas 同じくROSA26 locusにCAG-lsl-tdTomatoが挿入されているAi9やAi14ではCre発現前にtdTomatoが低発現することが知られており、その旨がjackson labにも注意書きに記載されています。 ただ今回のtdTomato発現がどの程度かにも依りますので、別な理由があるかも知れません、おっしゃる通りERT2に変異が入って内在性エストロゲンにも反応するようになってしまったとか、可能性はあります。 Tamoxifen未注射でtdTomato陽性細胞が観察されている組織切片を使って、PCRでfloxの組み換えをチェックするのは1案です。 組み換えが起きていなければ、あとはリーク発現の程度問題ですので、今回作製したトレーシングマウスと掛け合わせ前のreporterマウスとで、リーク発現の程度を比較し、その参考データを載せれば手堅い印象です。 もしも組み換えが起きていたら、原因究明をしっかり行わないとおじゃんの危険が...

(無題) 削除/引用 No.11866-2 - 2023/10/21 (土) 22:18:55 - おや まず交配に用いた親がタモなしでも光っているか調べてはいかが？ ないと思いますが、タモはエストロゲン類似体なので、女性ホルモンがCreを活性化させてしまった？ ほんとにtdTom陽性なのか、あるいは自家蛍光なのか？ タモ投与有無でR陽性細胞でのtdTomの発現強度はいかほどか、くらいは検証してみてもいいかもですね。

CreloxPを用いたtracing mouse 削除/引用 No.11866-1 - 2023/10/20 (金) 19:58:25 - run 私の研究室では、新しいトレーシングマウスを作製しました。Rという遺伝子が発現している細胞でのみTdTomatoが発現するというマウスです(RCreERT2::R26-TdTomato)。 みなさんご存知の通り、Tamoxifenを注射することでCreリコンビナーゼがworkし、loxP配列に挟まれたSTOP配列が抜けるという仕組みになっています。少なからず、理論的にはそういうマウスです。 ただ、Tamoxifenを注射しなくてもTomatoのシグナルが検出されてしまいました。 考えたことは、 1. CreERT2の配列がおかしくなっている(mutation?) 2. R遺伝子のlocusにCreERT2配列が入っていない 3. R26-TomatoをHOMで組み込んでいるため、蛍光が強すぎて漏れている の3点です。 データがおじゃんになる事件に研究室全体がざわついております… 調べてもなかなか出てこないため、有識者の方がいましたらご教授いただけると幸いです。

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