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希望条件詳細 削除/引用 No.11842-7 - 2023/10/13 (金) 13:09:45 - ほ 組織の免疫染色は抗体等のツールよりも検体自体や実験条件に起因することが多いです。少し改変なりいくつか注意するなりするだけで劇的に改善されることがあります。 もし可能ならば以下の点について教えてください。 1 標本の種類　　パラフィン or 凍結 2 固定条件　　　　PFA or 有機溶媒　　or　その他　　　固定時間と温度も 3 凍結の場合の固定のタイミング　　包埋前に固定　or　未固定で包埋凍結し、薄切後に固定 4. 抗原賦活処理　　　　あり、or なし ありの場合は方法、条件 5 切片作成から染色までの保存状況　　　期間、保管温度　　　 ６パラフィンブロックもしくは凍結ブロックにしてから薄切までの保存状況　　　期間、保管温度

(無題) 削除/引用 No.11842-6 - 2023/10/13 (金) 06:08:29 - おお いろいろなメーカーのＩＦの染色例でホルマリン系で固定しているものはいっぱいありますけどね。 Ｋなどがターゲットになるのでエピトープが認識できなくなるということを考えているのでしょうけど、すべてのＫが反応するようには思っていないんですけど。

(無題) 削除/引用 No.11842-5 - 2023/10/12 (木) 15:44:11 - toto ホルマリン固定はKDEL抗体には使えないですよ。KDELなので。メタノール固定でやれば普通、染まります。

(無題) 削除/引用 No.11842-4 - 2023/10/12 (木) 12:30:02 - おお 動物組織でＰＦＡ固定どういう手順でやっているのかちょっとわからないですが、膜タンパクはＰＦＡでうまく固定できない場合もあるようです。もしできるならＰＬＰ固定にしてみてもいいかもしれません。 https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0129-6320.html 固定液として売ってますし、自作もそんな難しくないのではと思います。 こちらでも話題になっています。 http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2012/biotechforum.cgi?mode=view;start=4;Code=5093

(無題) 削除/引用 No.11842-3 - 2023/10/12 (木) 12:03:09 - Emy おお先生 ありがとうございます。 4% PFAで4度、一晩の固定をしています。 Biolegend Rat-anti-calnexinやStressgeneのMouse-anti-KDELではうまく染められませんでした。 培養細胞でもこれらの抗体はあまり小胞体らしく染まりません。 GFP-KDELをトランスフェクトすると培養細胞では小胞体らしくGFPが見られます。

(無題) 削除/引用 No.11842-2 - 2023/10/12 (木) 00:17:25 - おお 私は経験はない外野ですけど、固定方法などで選択が変わる可能性があると思いましたので、その辺は開示できませんか？

マウス組織の小胞体を染められるウサギ以外の抗体 削除/引用 No.11842-1 - 2023/10/11 (水) 15:47:11 - Emy 件名の通りなのですが、マウス組織の小胞体マーカーを染められるウサギ以外の抗体を探しています。 これまでに反応性がマウスであることを確認した上で本当らしい染色画像をもとに2つほど注文をしましたが、いずれも染まらなかったです。 私の興味あるタンパク質は小胞体にいまして、その抗体では小胞体っぽく染まっています。 ただKDEL、Calnexin抗体（型番などは敢えて言えません）はワークしませんでした。 皆様の中で、小胞体を染められてる方いらっしゃいましたら、ウサギ以外の抗体でおすすめのものがありましたらご教示いたけましたら幸甚です。

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