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(無題) 削除/引用 No.11838-5 - 2023/10/11 (水) 05:51:58 - おお 陽イオン交換かけているのはＬＰＳを除く目的もありそうだね。細胞などに使うならそこもよく考えた方がいいのかもしれない。ＮｉＢｅａｄｓで除けないとは言わないけど、そこは詳しく知らないし。

(無題) 削除/引用 No.11838-4 - 2023/10/11 (水) 01:24:09 - おお https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S104659280400035X?via%3Dihub#aep-section-id29 これを見ると陽イオン交換かけてから陰イオン交換とかなり精製度を上げています。ニッケルカラムだけではそこまできれいにならないと思います。もちろん複合体を形成させてから複合体だけのフラクションを得るために精製するなら話はすこし違ってきますが。またニッケルビーズ、陰イオン交換の二つでもかなりきれいにはなります。 ググってみると以下の文献にオープンカラムの図があるようですし、詳しい説明もあるんじゃないかな。ちょっと私の施設ではこの文献と契約していないようで見れないけど。 https://currentprotocols.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/cpet.6

(無題) 削除/引用 No.11838-3 - 2023/10/10 (火) 17:46:11 - おお >[Re:1] mhcさんは書きました : > MHC テトラマ―の作製を試みています。 > 大学にFPLCが無いために、His-tagで回収したいと考えております。 > つまり、MHC-His, B2m-HisをNi-NTAカラムで精製し、混ぜると > MHC-B2m複合体が出来るのではないかと考えているのですが、 複合体になってないものをのぞくためにFPLCを使っているのでは。要するに混ぜるだけでは不完全？ 参照している論文が見たい。

(無題) 削除/引用 No.11838-2 - 2023/10/10 (火) 17:29:18 - おお オープンカラムでもいいんじゃね。

MHCテトラマ―作製時にHis-tagをつけるのはあり？ 削除/引用 No.11838-1 - 2023/10/10 (火) 17:15:27 - mhc MHC テトラマ―の作製を試みています。 まず、テトラマ―作製の前提としてMHC-B2mの複合体を作製することが必要です。 文献を見ますと、どの文献もMHCを発現、可溶化させた後、B2mと複合体を形成後、FPLCで回収しています。 大学にFPLCが無いために、His-tagで回収したいと考えております。 つまり、MHC-His, B2m-HisをNi-NTAカラムで精製し、混ぜると MHC-B2m複合体が出来るのではないかと考えているのですが、 FPLCでの回収は必須なのでしょうか？ このようにFPLC無しでテトラマ―作製をされている方はいらっしゃいますか？ His-tagで精製しテトラマ―を作製している文献は見当たらず、難しいのかなと感じているのですが。 詳しい方がおられましたらご教授いただければ幸いです。 どうぞよろしくお願いいたします。

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