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レンチウイルスを感染させた後の経過 トピック削除
No.11828-TOPIC - 2023/10/06 (金) 12:31:23 - ラックビー
レンチで浮遊性細胞に変異の入った遺伝子を導入しようとしています。
一つの実験はTransientでもよくて、もう一つの目的はstableを作製することです。

今回レンチを扱うのが初めてです。

感染させるとTransientな蛍光マーカーの発現はそこそこみられるのですが、10日ほど経つと蛍光マーカーが極めて弱くなります。

ゲノムにインテグレートされていないのでしょうか。

一般的な接着細胞ですと発現量は、どのような経過をたどるのでしょうか。
そもそもレンチの場合、Transientな発現という概念は適用していいのでしょうか。

もう一点聞きたいのは、レンチの場合、ElectroporationやLipofectionに比べて発現量自体は弱いのが一般的でしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.11828-2 - 2023/10/07 (土) 01:47:52 - おお
レンチのゲノムRNAから直接タンパク合成もできるはずですからね。それをトランジェントと一般的にいうかは知りませんが。

そのレンチは薬剤耐性マーカーを持ってますか?それでセレクションして維持しているならインテグレーションされている(安定導入株である)といえると思います。

その場合、プロモーターの不活性化とかプロモーターが細胞とあってない(ゲノムRNAからは発現するけどインテグレートされると発現しない)などの原因かもしれません。

>レンチの場合、ElectroporationやLipofectionに比べて発現量自体は弱いのが

そうともいえないと思います。プラスミドの場合、うまくいけば相当のコピー量が細胞に入れれます。しかしながらレンチの場合もMOIを調整することは可能です。

レンチウイルスを感染させた後の経過 削除/引用
No.11828-1 - 2023/10/06 (金) 12:31:23 - ラックビー
レンチで浮遊性細胞に変異の入った遺伝子を導入しようとしています。
一つの実験はTransientでもよくて、もう一つの目的はstableを作製することです。

今回レンチを扱うのが初めてです。

感染させるとTransientな蛍光マーカーの発現はそこそこみられるのですが、10日ほど経つと蛍光マーカーが極めて弱くなります。

ゲノムにインテグレートされていないのでしょうか。

一般的な接着細胞ですと発現量は、どのような経過をたどるのでしょうか。
そもそもレンチの場合、Transientな発現という概念は適用していいのでしょうか。

もう一点聞きたいのは、レンチの場合、ElectroporationやLipofectionに比べて発現量自体は弱いのが一般的でしょうか。

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