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(無題) 削除/引用 No.11803-11 - 2023/09/26 (火) 14:57:46 - おお そう言えば、古ーい(おそらく10年弱前の)ものを使った時、効かなかったので、ATP加えて使っていて、ワークしていた事を思い出した。それも相当昔のこと。

(無題) 削除/引用 No.11803-10 - 2023/09/26 (火) 14:40:31 - Skeptics 明後日には（コントロールをきちんと置けば明日にも）結果が出るんだから、四の五の言う前にやってみたら？

4年前のligase 削除/引用 No.11803-9 - 2023/09/26 (火) 14:30:43 - apes 皆様、ご意見ありがとうございます。 おおさん ＞使えるとか、そんなこと無責任に言えると思いますでしょうか。 もちろんそうですし、それに対して責任取れ、なんてことは、いたしませんし。 ただただ経験談をお聞きしたいだけなんで。 ヒントさん ＞試供品を業者からもらう、、、、 これだ！

(無題) 削除/引用 No.11803-8 - 2023/09/26 (火) 14:30:20 - ああ 所属ラボにある４年以上前の制限酵素は使えているんで使えるとは思いますが保存状態とかあるので断言はできないですね 他の方々のいうように一度試すのがいいと思いますが、ちょっと使うだけなら↓のような無料サンプルもらうってのもありかと思います https://www.cosmobio.co.jp/product/detail/bin-20130904-10.asp?entry_id=11646

(無題) 削除/引用 No.11803-7 - 2023/09/26 (火) 14:06:16 - AA 普段クローニングをされないラボということならむしろコンピの状態のほうがクリティカルな気がします。

(無題) 削除/引用 No.11803-6 - 2023/09/26 (火) 13:56:56 - ヒント 試供品を業者からもらう、、、、

(無題) 削除/引用 No.11803-5 - 2023/09/26 (火) 13:40:54 - G25 一般論として、とくにアクシデントもなく保存されていたなら4年くらいじゃダメにはならないです。むかしはプロテアーゼの夾雑に依る分解なんかで色々な酵素が保存中に失活しやすかったですが、いまの酵素類はrecombinantに置き換わっていたり精製や保存液がよくなっていますのでそうそう失活しません。 ライゲーションバッファ中のATPなんかも、たやすく分解するものでもないし。 一応、適当なDNA断片でligationしてみてチェックしたらいいでしょう。 Lambda Hind3断片とかあるとうってつけですが、適当なプラスミドを熱失活できる制限酵素で消化、熱失活したものを用意して、そのままのものと、室温15-30分程度ライゲーションしたものを並べて泳動してみればいい。 ライゲースが生きていれば、DNAが重合して分子量の大きいバンドが見えるはず。

(無題) 削除/引用 No.11803-4 - 2023/09/26 (火) 13:20:25 - AA 保存状態にもよるでしょうしなんともいえませんが、まずは試されてみてはいかがでしょうか？ リガーゼを買うにしろ買わないにしろその他の作業は同じでしょうし、工程も数日あれば終わります。 クローニング元が貴重だったとしてもPCR1回程度であればロスしてなくなるということもないのでしょうからまずは試してみてそれから考えればよいのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.11803-3 - 2023/09/26 (火) 12:56:20 - おお 使えるとか、そんなこと無責任に言えると思いますでしょうか。 感覚的、経験的には使えそうな気がするけど使えなかったら責任持てないですしね。多少活性が減ってもうまくいくようなコンストラクトもあれば活性がしっかり残ってないとうまくいかないコンストラクトもあるだろうし（同じ長さの違うフラグメントを入れても差が出るから難しいとか難しくないとか言い当てるのもできないし）。 周りのラボにワークしているものがないか聞いて１、２回の反応分なら使わせてもらうというのもできなくはないと思うけど。 まあ研究費がそういう風に振り分けられてないから厳密にはだめっていう話もあるけど、科研費とかでなく大学から直接雀の涙ほどのお金が出ているだろうからその枠内という話にもできなくはないだろうし。

(無題) 削除/引用 No.11803-2 - 2023/09/26 (火) 12:46:16 - TS 断言はできませんが、普通は全然使えると思います。

4年前のligase 削除/引用 No.11803-1 - 2023/09/26 (火) 12:39:08 - apes いつもお世話になっております。 実験上、どうしても一つの遺伝子をクローニングしなければ ならなくなり、その一遺伝子だけにあまりお金と手間をかけたく ありません。 冷凍庫を漁っていると、４年前に購入したプロメガのリガーゼを 発掘しました。 使えると思います？ いや買えよって話なんですが、そんなにクローニングしないしなぁ。

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