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(無題) 削除/引用 No.11774-10 - 2023/09/13 (水) 22:13:06 - 独り言 自分で購入したときは。 Low glucose DMEM+ピルビン酸、グルタミンでした。 CSはラボになかったので、ずっとFBSでやってますが、ちゃんと増えて、脂肪の分化もできました。

(無題) 削除/引用 No.11774-9 - 2023/09/13 (水) 21:54:43 - あああ FBSの方がロット差が出にくいのでFBSで培養してみたらどうでしょうか

(無題) 削除/引用 No.11774-8 - 2023/09/13 (水) 19:36:16 - BBB 血清のロットがあわないとか、培地に添加すべきものを忘れていてしてないとか濃度間違えてるとか（実例として、グルタミン不含培地でグルタミン入れてないとか、抗生物質の濃度の単位や桁１つ間違えてるとかあります）、培地の消費期限を大幅に過ぎてるとか、培地古過ぎとか、インキュベータの温度やCO2コントロールがおかしいとかほんとうの数値が正しく表示されてないとか、は一応慎重に確認したほうがいいとおもいますが、まずは入手元に問い合わせて相談してみるべきと思います。本筋の研究以外のところで時間と労力を費やすのはあまり良いことでないとおもうので。 入手元は公的な機関ですしスタッフはその方面のプロですから相談には適切に対応してくれるはずです。もし不良ロットの可能性があれば交換も検討してくれるかもしれないし。

(無題) 削除/引用 No.11774-7 - 2023/09/12 (火) 18:14:02 - てってってー ストックのロットにもよるでしょうが、元々の細胞数ってどのくらいでしたか？ 概ね1-10E+05cell/vialのようですが24well内にどのように撒かれたのかわかりませんが、1wellに撒いてるとするととてもじゃないけど多すぎ、逆に24well全面に撒いてしまうと薄すぎるかもしれません。 細胞バンクの記載を見ると4-6E+03 cells/sq.cm程度で播種してたとのことなので、その辺りで細胞数を振って播種してみたりしましたか？

(無題) 削除/引用 No.11774-6 - 2023/09/12 (火) 18:11:28 - 774 JCRB細胞バンクからの購入だと1バイアルに1x10^5-1x10^6程度は入っていますよね。 それを24wellにいきなり蒔いたんですか?どういう密度で?

(無題) 削除/引用 No.11774-5 - 2023/09/12 (火) 03:54:58 - おお 入手先にも相談してみてください。 もしかしたら血清のロットの相性かもしれません。

(無題) 削除/引用 No.11774-4 - 2023/09/12 (火) 02:29:41 - L1 バンクの指定通りの培地なら大丈夫だと思うのですが、high glucose ではないでしょうか。ATCCだとこちらの high glucose 培地を推奨しています。 <https://www.atcc.org/products/30-2002?_gl=1*1k2w1am*_up*MQ..&gclid=Cj0KCQjw9fqnBhDSARIsAHlcQYRJA5wcwy_jTUq1cJPApMoFbH2BXAOi-v2kq-PHkFjLI_tbuJCT0icaAn4EEALw_wcB>

(無題) 削除/引用 No.11774-3 - 2023/09/12 (火) 00:49:59 - 3T3-L1 qq様 申し訳ありません。ご指摘通りの誤記でした。 3T3-L1の培養についてご存知でしたら引き続きよろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.11774-2 - 2023/09/11 (月) 22:29:01 - qq 培地添加物は、glutamateではなくglutamineですよね？

3T3-L1細胞が増えない 削除/引用 No.11774-1 - 2023/09/11 (月) 19:47:24 - 3T3-L1 皆様、平素は大変お世話になっております。 細胞培養につき、皆様からのご教示をいただきたく、トピックを立てました。 何卒よろしくお願いいたします。 私の研究室で、この度、3T3-L1培養細胞を取り扱うことになりました。 そこで医薬基盤研がもたれるセルバンク事業から3T3-L1を注文し、以下の培地で培養を開始しました。 low glucose DMEM (+glutamate, +pyruvate) + 10% new born calf serum しかし残念ながら、細胞が増殖せず困っています。 dishは通常のtreated dishを使っており、frozen vialを解凍、遠心、再懸濁後に24-well dish内で培養しても10日経っても1, 2回程度しか増殖せず、これから増えるような気がしません。 3T3L1を培養されたことのある方がいらっしゃいましたら、培養のコツ、継代のコツ、培地の組成などについてご教示いただけませんでしょうか？ new born calf serumではなく、FBSにした方が良いのか、それともそれをするとその後の脂肪細胞分化実験に支障がでるでしょうか。 ow glucose DMEMではなく、通常の4.5 g/L glucoseでも良いのでしょうか。 非常に困っています。 何卒ご教示いただけましたら幸いです。 よろしくお願いいたします。

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