Bio Technical フォーラム

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RNPトランスフェクションでのgRNA合成について トピック削除
No.11753-TOPIC - 2023/09/01 (金) 23:58:27 - sgRNA
初めて質問させていただきます。
これまでプラスミドを使って遺伝子のノックアウトを培養細胞で作製してきましたが、今後ノックインに挑戦したく、RNP方法を用いようと思っています。

そこで、gRNAの受託先として、費用がそこまで高くなく、また比較的早く納入されるところを教えていただきたいです。初めてのことでコメントいただけると嬉しいです。

またcrRNA＋tracrRNAよりかは、gRNAを一つ頼んだ方が編集効率も一般に上がると読みました。
それがコンセンサスかも併せてご教示いただけますと幸甚です。
　
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(無題) 削除/引用
No.11753-2 - 2023/09/02 (土) 03:31:58 - おお
テンプレートプラスミドあるいはテンプレート合成ＤＮＡを作って、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼで合成するだけだけどね。分解を防ぐために修飾を施したものとかがあるなら別かもしれませんが、

ちゃんと全長がとれて、精製ができてればいいわけで多数いっぺんに必要でなければ自分で作っちゃえばいいと思うけどね。

https://www.neb.com/protocols/2015/11/24/sgrna-synthesis-using-the-hiscribe-quick-t7-high-yield-rna-synthesis-kit-neb-e2050

RNPトランスフェクションでのgRNA合成について 削除/引用
No.11753-1 - 2023/09/01 (金) 23:58:27 - sgRNA
初めて質問させていただきます。
これまでプラスミドを使って遺伝子のノックアウトを培養細胞で作製してきましたが、今後ノックインに挑戦したく、RNP方法を用いようと思っています。

そこで、gRNAの受託先として、費用がそこまで高くなく、また比較的早く納入されるところを教えていただきたいです。初めてのことでコメントいただけると嬉しいです。

またcrRNA＋tracrRNAよりかは、gRNAを一つ頼んだ方が編集効率も一般に上がると読みました。
それがコンセンサスかも併せてご教示いただけますと幸甚です。
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