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(無題) 削除/引用 No.11722-3 - 2023/08/19 (土) 18:25:03 - m みさま 記載し忘れておりました。培地にはNeuro-Brew以外にL-グルタミンを添加しています。 細胞の調製時点での生存率は95~85%ほどです。 他の実験で海馬ニューロンにエレクトロポレーションをして12時間のタイムラプスイメージングを行っており、こちらはworkしている状態のため、細胞の調製は問題ないと考えております。 DIV2,3またはDIV7での観察を行いましたが、どちらとも結果に違いはありませんでした。DIV7以降の観察は軸索と樹状突起の判別が難しく行っていません。 また、タイムラプス中にはCO2は供給しておらず、15mMのHEPESを添加しています。

(無題) 削除/引用 No.11722-2 - 2023/08/19 (土) 17:32:37 - み グルタミンは添加されていないのでしょうか？ そもそもの神経細胞の生存や成熟度、状態に問題ないのでしょうか？ 下手な人が調製した神経細胞は貧弱で半死に状態のことが多々ある。 何週間分化させているのやら、タイムラプス時にCO2供給されているのかなど。

MItotrackerで染色した神経軸索におけるイメージング 削除/引用 No.11722-1 - 2023/08/19 (土) 14:54:28 - m 海馬ニューロンをMitotracker Redで染色して軸索のミトコンドリアトランスポートについてのタイムラプスイメージングを行いたいと考えています。 染色条件を検討したりしていますが、現時点で、「見えているミトコンドリアの中で動いている割合が先行文献よりかなり少ない」です。 どのようにすれば先行文献なみに動いているミトコンドリアの割合を増やすことができるでしょうか。 染色条件は、25 nM or 10 nMのMitoTracker Redで10 min incubation→wash with Neurobasal medium twice→replace with Neurobasal+1 NeuroBrew-21です。 5つの軸索を撮影して、2つの軸索はミトコンドリアが全く動いていません。 その他の軸索は撮影したエリアの中で1-3つのミトコンドリアは動いているが、それ以外は全く動かないといった様子です。 撮影は25度と37度で試しており、染色後45分までに撮影を済ませています。 25度と37度で動いているミトコンドリアの割合に変化はありませんでした。 どなたかご教授いただけたら幸いです。 よろしくお願いいたします。

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