Bio Technical フォーラム

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細胞分化誘導後のフローサイトメトリー トピック削除
No.1170-TOPIC - 2012/11/19 (月) 20:02:18 - とんたろう
単球系の細胞(THP-1細胞など)を分化誘導し、分化誘導後に細胞表面レセプターを染色し、フローサイトメトリー解析で発現変化を観察したいと考えています。
しかし、細胞をマクロファージなどに分化誘導させると、セルカルチャーフラスコにかなり強く結合してしまい、なかなか剥離することができません。
論文では、分化誘導後にフローサイトメトリー解析を行っているものはいくつもありますが、細かいテクニックまでは記載されておらず、細胞の処理の仕方に苦戦しています。
どなたか経験のある方がいらっしゃいましたら、教えて頂けないでしょうか?
ちなみに低接着性のフラスコ使用してみましたが、コロニーを形成してしまい、うまく解析ができませんでした。
以上、宜しくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.1170-4 - 2012/11/20 (火) 12:54:10 - まっくろん
 RAW264細胞(マウスマクロファージ様細胞で同じく接着性が強い)を扱っていたときは,スクレーパーで回収していました。全面を1度優しくなぞることで,回収出来ました。また,PIで染めましたが,この程度であればPI陽性細胞がたくさん出てくるということはありませんでした。使用していたスクレーパーはIWAKIのゴムのやつです。

(無題) 削除/引用
No.1170-3 - 2012/11/19 (月) 23:37:51 - 通りすがり
セルスクレーパーで剥がして問題ありません。
やり過ぎると死細胞が増えるので注意してください。

人によってはピペットマンで剥がしてましたが、回収率が下がるんで個人的には好きじゃないです。

(無題) 削除/引用
No.1170-2 - 2012/11/19 (月) 23:02:39 - おお
http://www.ipros.jp/product/detail/154900001/
そのような実験ではこれを使っているとは言いませんが、こういうのも選択肢かなと思いました。

細胞分化誘導後のフローサイトメトリー 削除/引用
No.1170-1 - 2012/11/19 (月) 20:02:18 - とんたろう
単球系の細胞(THP-1細胞など)を分化誘導し、分化誘導後に細胞表面レセプターを染色し、フローサイトメトリー解析で発現変化を観察したいと考えています。
しかし、細胞をマクロファージなどに分化誘導させると、セルカルチャーフラスコにかなり強く結合してしまい、なかなか剥離することができません。
論文では、分化誘導後にフローサイトメトリー解析を行っているものはいくつもありますが、細かいテクニックまでは記載されておらず、細胞の処理の仕方に苦戦しています。
どなたか経験のある方がいらっしゃいましたら、教えて頂けないでしょうか?
ちなみに低接着性のフラスコ使用してみましたが、コロニーを形成してしまい、うまく解析ができませんでした。
以上、宜しくお願い致します。

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