Bio Technical フォーラム

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凍結切片の後固定と前固定 トピック削除
No.117-TOPIC - 2012/02/04 (土) 01:31:29 - TS
いつも勉強させてもらっております。

マウス消化管の凍結切片を作成して、蛍光免疫染色など、組織学的解析を行っています。

切片を作成する際には、前固定(ホルマリン固定後、包埋)、あるいは後固定(切片を切ってから、ホルマリン固定)となりますが、
前固定に比べて、後固定の切片は、組織の形態がわずかにしぼんだような感じになってしまいます。

この現象は、仕方がないのでしょうか?
あるいは、Rehydrationなどの工程をうまくやれば、後固定でも前固定と同等の携帯を維持した切片を作れるものでしょうか?

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.117-2 - 2012/02/06 (月) 08:59:53 - 組織
脱水後の組織収縮が問題ということでしょうか?

新鮮凍結切片では固定が弱いことが多いので(抗原性を保つため)、エタノール脱水で収縮が起こる可能性はあると思います。また、固定液に有機溶媒を使っても収縮は起こります。

ただ、それでも形態観察は十分可能だと思いますので、もし評価上問題があるのであれば、他の要因もあるかもしれません。

凍結切片の後固定と前固定 削除/引用
No.117-1 - 2012/02/04 (土) 01:31:29 - TS
いつも勉強させてもらっております。

マウス消化管の凍結切片を作成して、蛍光免疫染色など、組織学的解析を行っています。

切片を作成する際には、前固定(ホルマリン固定後、包埋)、あるいは後固定(切片を切ってから、ホルマリン固定)となりますが、
前固定に比べて、後固定の切片は、組織の形態がわずかにしぼんだような感じになってしまいます。

この現象は、仕方がないのでしょうか?
あるいは、Rehydrationなどの工程をうまくやれば、後固定でも前固定と同等の携帯を維持した切片を作れるものでしょうか?

よろしくお願いします。

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