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(無題) 削除/引用 No.11655-3 - 2023/07/26 (水) 16:33:31 - やま かなり適当にやっても大丈夫です。大体5 uMでサーマルサイクラを95Cで30秒キープ後、最速で4Cまで温度を下げてます。 ちなみに私は相補的オリゴ2本を一緒にリン酸化し、その後に上記のようにアニーリングしています。そして適当にバッファーで薄めてライゲーションしています。

(無題) 削除/引用 No.11655-2 - 2023/07/26 (水) 08:51:20 - 774R ggrks oligo dna annealing protocol

相補的な2つのオリゴをduplexにさせる方法 削除/引用 No.11655-1 - 2023/07/26 (水) 08:46:21 - xyzw 80塩基ほどの相補的な2つの1本鎖オリゴがあります(末端にsticky endができるような形にデザインしている) これを混ぜて２本鎖を形成させたいです。(その後この反応産物を制限酵素で処理したvectorにinsertする。オリゴの末端は2本鎖形成させる前にリン酸化してある状態) 95度で数分heatした後、その後ゆっくり冷やしていけば2本鎖ができるかな、という反応条件のラフなイメージはあるのですが、ちゃんとした反応条件をご存じの方、日頃こういうことをおこなっている方がいましたら、反応条件をご教示していただけないでしょうか？　何卒よろしくお願いいたします。

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