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(無題) 削除/引用 No.1164-5 - 2012/11/19 (月) 01:26:20 - KY 経験上、トランスフェクション後、ケイダイしても、ノックダウン効率には全く問題ありません。 おおさんも行っている通り、２回ノックダウンしてもよりよいと思います。

(無題) 削除/引用 No.1164-4 - 2012/11/19 (月) 01:13:33 - おお 2回siRNA処理する方法もありますね。 増え過ぎるなら、一回トランスフェクションして、その細胞をまきなおして、もう一回するとか。

(無題) 削除/引用 No.1164-3 - 2012/11/19 (月) 00:08:28 - ぽすどく ＞ＫＹさん 　情報ありがとうございます。 　追加で質問なのですが、たとえば５日も待つと細胞が増えすぎると思うのですが、撒きなおすのでしょうか。あるいは、スタートの時点で細胞密度が低いのでしょうか。（後者だと、それはそれでよくないような気もしますが。。。） 　ＨｅＬａだと、どんなに薄まきにしても２，３日に一度は継代の必要があるように思うのですが、他のラボではそんなことはないのでしょうか。 　siRNAもＨｅＬａもともに初心者なので、引き続きご教授いただければ幸いです。

(無題) 削除/引用 No.1164-2 - 2012/11/18 (日) 02:30:46 - KY 確かに細胞増殖が遅い細胞の方が効きが良いという話は聞いたことがあります。 しかし、HeLaはsiRNA の実験にかなり多くのラボで使用実績があり、HeLaでsiRNA が効果ないということはありません。実際私が今まで使った細胞では、HeLaが一番効率よかったです。トランスフェクション後、３−５日で十分な効果が見られます。 おそらく現在のsiRNAのトランスフェクション試薬や、方法などがHeLaなど汎用の細胞に適応して作られたためだとも思えます。 なので、質問者さんのノックダウン方法が使用している細胞に適しているが、HeLaでは効率のよくない方法（一般的ではない方法）など使用していれば、HeLaで効率がわるくなるのかもしれません。

HeLaでsiRNA 削除/引用 No.1164-1 - 2012/11/17 (土) 13:49:03 - ぽすどく 　siRNA初心者です。当初は細胞増殖の遅い細胞で実験を行っていたところ、順調にｍRNAレベルが落ちました。しかし、最近、とある理由で細胞増殖の速いHeLaに切り替えたところ、ほぼ全く落ちなくなりました。 　Transfectionから細胞回収までは７２時間待っています。やはり、この間に細胞分裂が頻繁にあることで、siRNAが薄まってしまっているのでしょうか。 　基本的なところだとは思うのですが、なにぶん経験が浅いので、教えていただけると大変助かります。よろしくお願いいたします。

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