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(無題) 削除/引用 No.11552-2 - 2023/06/23 (金) 16:02:49 - QWER C3はわりといろんな組織で程度の差はあれどそこそこ産生してるので沈着したC3との区別は健常な動物組織との比較は必要と思います。 あと、組織に沈着したC３を見るならば、補体反応のカスケードをみればわかるように、沈着しているC3はかなり断片化したものなので、どんな優れたC3抗体でもエピトープが断片内になければ検出できないです。つまりC3を認識するということよりも補体反応経路の分解生成産物であるC3a（建前は可溶性ですが受容体があるので組織にも残ります）とか C3dを認識できる抗体かどうかということが重要と思います。この点をよくわかってもらえなくて、IHCで検出できないので学会などで補体経路は関係ないと結論づけてる人がときどきいます。 血中のC3がBGになるので血液は灌流して除去しましょう。心臓等からPBS等を注入して腎臓が色が抜ければOKです。 凍結切片も検討ください。IHCではパラフィンと比べたら成功率が格段に上がります。腎臓でしたら組織がそこそこ硬いので、凍結でもパラフィンと同等のきれいな標本は作れます。

パラフィンブロックの腎病理におけるC3染色について 削除/引用 No.11552-1 - 2023/06/23 (金) 00:52:38 - Past いつも拝見しております。 パラフィンブロックの腎病理におけるC3染色について教えていただきたいです。 パラフィンブロックの腎組織ではC3の染色が難しいことはしっておりますが、成功されている方がいれば教えてください。 これまでに試した方法です。４種類の方法で抗原不活化を行いましたがうまくいっていません。 １、脱パラフィン(xylene and ethanol)　→流水洗浄 ２、抗原賦活化　 �@0.05% Protease,bacterial-sigma type�]�]�W /PBS 室温、120分、湿潤箱 �A0.1% Protease,bacterial-sigma type�]�]�W　/PBS 室温、120分、湿潤箱 �B0.002%ProteinaseK /PBS 37℃、30分、湿潤箱 �Cクエン酸Buffer　（pH6.0）、オートクレーブ（120℃　20分） ３，PBS洗浄　10min×3回 ４、一次抗体（FITC conjugated）室温60分　遮光　湿潤箱 IgA/FITC(F0204) 5%Goat Serum/PBS 1/30 C3/FITC(F0201)　　5%Goat Serum/PBS 1/10 ５、洗浄(PBS 10分×2回　1時間×1回) ６、DAPI 5%Goat Serum/PBS 1/1000　30分 ７、洗浄（PBS5分×3回）

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