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RNase フリーのヒト血清アルブミン トピック削除
No.11519-TOPIC - 2023/06/14 (水) 18:17:03 - AAA
いつも勉強させてもらっています。
NakedのmRNAを物理的エネルギーを使って細胞にトランスフェクションする研究をしています。

使用する試薬類を可能な限りRNaseフリーなものを使用する条件を調整しているのですが、どうしてもほんの微量のヒト血清アルブミンを入れなくてはなりません。
そこで、リコンビナントなどのヒト血清アルブミンでRNase フリーとして販売されているものをご存じないでしょうか?
ご存じでしたら、情報よろしくお願いいたします。
 
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No.11519-6 - 2023/06/21 (水) 09:54:33 - AAA
なるほど。ありがとうございます。確かに購入したHSAとmRNAをRNAse free water中で混合してみて分解が生じるか確認してみるのが良さそうですね

(無題) 削除/引用
No.11519-5 - 2023/06/20 (火) 21:33:25 - SYBR master
>[Re:4] AAAさんは書きました :
> BSAがあるならHSAも無理ではないと思うのですが。

BSAは昔(と言っても10年くらい前まで)は血清由来のfraction Vとかを使用していました(なぜfravtion Vなのかの詳細はきっとG25さんがしてくれますw)。ただ、DNAやRNAの酵素反応でいくつかの問題、これは私個人ではあまり経験が無いのですが、近年ごく微量のDNAやRNAを使用するようになって、微妙なnuclease活性の存在が顕在化したらしいです(ただし、論文としては有るかどうかは知らないです)。そこでrecombinant BSA (rBSA、NEBの説明見ると、断言はしていないけどたぶん精製用のTag付き)を作成、またはアセチル化によるnucleaseの不活化でnuclease-freeになっています(これも、ここ5年くらいの話です)。実際、NEBがBSAをrBSAに変更したのは、5年くらい前(もっと後で3年くらい前かもしれない)のことだと記憶しています。

rHSAも結構売られています(イネとか酵母で発現してますが、製品には精製用のTagはついていないようです)が、そもそもの目的がヒト細胞培養用(CART-T療法用とか)で、ヒト由来では無いので「ヒトに感染可能なvirus-free」の方が重要であり、nuclease testは必要な検査では無いので行っていないだけだと思います。核酸を扱う酵素反応においてはBSAをHSAに置き換える需要がそもそも無いため、今後もメーカー側でそのtestを行うことは無いと思われます。

もしnuclease-freeのHSAが絶対に必要なら、rHSAはそもそも高い試薬では無いので、自分でnuclease testを行ってみてはいかがでしょうか。一方でアセチル化方法は、私は知らないので情報提供できません。

(無題) 削除/引用
No.11519-4 - 2023/06/19 (月) 12:43:03 - AAA
おお様

ありがとうございます。そうなのです。
BSAでは時々ヌクレアーゼフリーの物が販売されていますが、HSAでは見つけられません。
BSAがあるならHSAも無理ではないと思うのですが。

(無題) 削除/引用
No.11519-3 - 2023/06/15 (木) 01:31:50 - おお
あ、ヒトじゃないといけないのね。。。

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No.11519-2 - 2023/06/14 (水) 21:32:11 - おお
NEBが制限酵素処理で酵素安定化のためにBSAをリコンビナントにしてたように思いますが、一応ヌクレアーゼフリーではないかと。時間があれば詳細を見てみます。ー

RNase フリーのヒト血清アルブミン 削除/引用
No.11519-1 - 2023/06/14 (水) 18:17:03 - AAA
いつも勉強させてもらっています。
NakedのmRNAを物理的エネルギーを使って細胞にトランスフェクションする研究をしています。

使用する試薬類を可能な限りRNaseフリーなものを使用する条件を調整しているのですが、どうしてもほんの微量のヒト血清アルブミンを入れなくてはなりません。
そこで、リコンビナントなどのヒト血清アルブミンでRNase フリーとして販売されているものをご存じないでしょうか?
ご存じでしたら、情報よろしくお願いいたします。

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