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膜貫通タンパク質に結合するタンパク質を単離するには トピック削除
No.11512-TOPIC - 2023/06/12 (月) 08:34:39 - EETT
50kDほどの膜貫通タンパク質に結合するタンパク質を単離するにはどういう方法があるのでしょうか。
市販品で組み換えタンパク質も打っているのですが、これに対してIPをするだけで十分でしょうか。

あるいは、細胞外ドメインと細胞内ドメインにわけたほうがいいなど、あるのでしょうか。
 
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No.11512-5 - 2023/06/13 (火) 09:00:28 - おお
細胞からIPしたほうがよさそうだけど。

(無題) 削除/引用
No.11512-4 - 2023/06/13 (火) 08:10:40 - momo
細胞質側に結合するのか細胞外側に結合するのかによっても使える方法が違う。

(無題) 削除/引用
No.11512-3 - 2023/06/12 (月) 17:46:12 - G25
膜タンパク質は膜に埋まって膜脂質と適切に相互作用している状態がnativeなので、精製した組換えタンパク質をいきなりlysateにぶっ込んでも良い結果は期待できないと思います。そもそもそのままでは水系溶媒に溶解、懸濁しないんじゃないかな。リポソームに埋め込むとかしないといかんのじゃないか。

細胞内ドメイン、細胞外ドメインだけ切り取れば可溶性にはなるだろうけど、本来の結合タンパク質が釣れるかどうかは、どこにどういう状態の結合ドメインがあるかによるんじゃないかな。

(無題) 削除/引用
No.11512-2 - 2023/06/12 (月) 14:25:04 - ん?
1回膜貫通タンパク質なのか、膜内で結合するのか膜表面で結合するのか、情報不足すぎませんかね。
ラボの先生に聞いた方がいいんじゃないの

膜貫通タンパク質に結合するタンパク質を単離するには 削除/引用
No.11512-1 - 2023/06/12 (月) 08:34:39 - EETT
50kDほどの膜貫通タンパク質に結合するタンパク質を単離するにはどういう方法があるのでしょうか。
市販品で組み換えタンパク質も打っているのですが、これに対してIPをするだけで十分でしょうか。

あるいは、細胞外ドメインと細胞内ドメインにわけたほうがいいなど、あるのでしょうか。

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