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(無題) 削除/引用 No.11503-5 - 2023/06/08 (木) 09:49:12 - あき みなさまご回答ありがとうございます。 後工程でコロニーを回収できるなら、かなり少ない量でも大丈夫なようですね。 現在、クローニングにはセルソーターを利用しようと考えており、必要な注入量は20μL程度で済みます。コンピテントセルの製品プロトコルに従いますと、ほとんどを使わずに廃棄することになるので皆さんにご相談した次第です。 https://www.cytena.com/products/single-cell-dispensers/b-sight/ ご協力ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.11503-4 - 2023/06/07 (水) 17:29:36 - momo 100μlのストックを融かしたら10μl×10 tubesに分注して1本使い、残り9本は再凍結しています。通常のコンストラクションであればこれでも多すぎるくらいですが、あまり液量を少なくしてもハンドリングしにくくなるので。

(無題) 削除/引用 No.11503-3 - 2023/06/07 (水) 16:48:52 - み Ligation product 1 ul コンピ10-15 ul SOC（LBでやってるけど） 100 ul これで全量プレートに塗っている。 １枚のプレートに塗れるボリュームとして丁度良い。

(無題) 削除/引用 No.11503-2 - 2023/06/07 (水) 15:36:15 - G25 やろうと思えばcompetent cellを1/10に減らしてたってできます。 >たとえばプラスミド1ngを含んだ100μlコンピテントセルを形質転換し、SOC Mediumで最終1 mlになるように調製するとします。 そういうスタンダードなスケールでやっていて、何uL播いてどれくらいのコロニーが得られているか、見当はつきますよね。 1 mLのうち100 uL播いて十分だとすれば、コンピーテントセルの10 uL相当で十分ということになるでしょう（スケールの違いで相が変わる現象があるかもしれないので完全に比例関係にはならないかもしれないが）。 プラクティカルには、一回に一個の形質転換をする場合、コンピーテントセル一本、100 uLあるいは50 uL全量使います。 一回に数種の形質転換を行う場合、一個につき一本じゃなく、一本を必要な本数に分けて使います。新規にligationしたコンストラクトからクローニングしようという場合は、過度に小分割することはしませんけど。クローニング済みの完成したプラスミドを大腸菌に戻すだけなら、かなり逸脱してもできる。 融解済みのコンピーテントセルを一部だけ使って残りは再凍結というのを数回繰り返しても行けるくらい（実際、そういう使用法もアリと書いてある市販のコンピもあった）。

形質転換の液量 削除/引用 No.11503-1 - 2023/06/07 (水) 14:39:04 - あき 形質転換時の液量に関してご相談させてください。 実験系や製品によって調製量は異なると思いますが、たとえばプラスミド1ngを含んだ100μlコンピテントセルを形質転換し、SOC Mediumで最終1 mlになるように調製するとします。 コンピテントセルの使用量を節約したいと考えており、どの程度まで減らすことができますでしょうか。「すべて半量で実施できた」など経験則で結構ですので知見がございましたらご教示ください。

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