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(無題) 削除/引用 No.11498-10 - 2023/06/07 (水) 21:48:18 - あの スピンダウンは、チューブを握った手の手首を、素早く約180度回転させるだけでもよいです。 あるいは、肘か肩を素早く上から下に動かすのでも、遠心力が作用するなら良いです。

(無題) 削除/引用 No.11498-9 - 2023/06/07 (水) 16:30:14 - tama >---さん たしかに，薄手のビニール袋なら上手くウォーターバス中でバイアルに張り付いて，かつ水の進入も防げますね．融解前の冷たいバイアルにはパラフィルムが密着しない可能性も考慮すべきでした．ありがとうございます！ >おおさん DMSOの濃度が局所的に大きくなると毒性に繋がるとは聞いたことがありましたが，融解時も気をつけるべきポイントでしたね．．．意外と細胞が耐えてくれることを願うばかりです．

(無題) 削除/引用 No.11498-8 - 2023/06/07 (水) 09:37:00 - おお >[Re:6] tamaさんは書きました : > >おおさん > > コメントありがとうございます！ > 凍結細胞の融解は素早さが命！と学び，途中で遠心してチューブ底に偏らせるところまで，考えが及びませんでした．．．手際よく操作すれば細胞へのダメージは抑えられますかね？ スピンダウンなら１分も回さないでしょう。 私はめんどくさいので氷が解けかけるまで握って、その後すぐふたを開けて培地を入れ出しして溶かしています。凍った中身をひっくり返し、培地の入った１５ｍｌチューブに入れてもいいでしょうけど。培地が暖かかったらすぐです。細胞がそこにたまっていることもあるので、一応培地を入れて吸い出してます。 融解に時間をかけないようにするのはDMSOの毒性を避けるためと聞いています。細胞によるかもしれませんが多少もたついても大丈夫なことも多いです。

(無題) 削除/引用 No.11498-7 - 2023/06/07 (水) 09:26:33 - --- パラフィルムは低温だと密着しないかもしれない。 ウォーターバスに浸けるときに薄手のビニールに入れるとか。 口を閉じなければ水圧で密着するだろうから温まりやすいと思います。 チューブ内に液体がはいらなければ大丈夫な気はします。

(無題) 削除/引用 No.11498-6 - 2023/06/07 (水) 09:01:03 - tama >おおさん コメントありがとうございます！ 凍結細胞の融解は素早さが命！と学び，途中で遠心してチューブ底に偏らせるところまで，考えが及びませんでした．．．手際よく操作すれば細胞へのダメージは抑えられますかね？

(無題) 削除/引用 No.11498-5 - 2023/06/06 (火) 23:56:00 - おお 融解したあと、あるいは途中でスピンダウンすればとおもいます。マイクロチューブようの遠心機にはまらなければ１５ｍｌのチューブにクライオチューブをいれて１５ｍｌチューブごと１０００ｇくらいでスピンダウンすればいいでしょう。

(無題) 削除/引用 No.11498-4 - 2023/06/06 (火) 21:50:48 - tama コメントありがとうございます！ >あのさん 凍結細胞の解凍はこれまで何度か実施しましたが，初めての状況で不安になっていました．解凍後の抗生物質添加培地での洗浄で様子を見てみたいと思います． >kenさん 仰る通りです．．．不測の事態にも対処できるようにストックの凍結細胞を多く作って損はないですね．

(無題) 削除/引用 No.11498-3 - 2023/06/06 (火) 20:51:41 - ken 2本しかないなら使いますが、もう一度、１０本くらいは作り直したほうが良いと思う。 ２本は少ないでしょう。

(無題) 削除/引用 No.11498-2 - 2023/06/06 (火) 20:46:24 - あの 蓋の内側も、通常は綺麗なはずです。 多少　不安でも、 融解後に、抗生物質入り培養液で洗えば大丈夫だと思いますけど。

クライオチューブ内での凍結細胞の偏り 削除/引用 No.11498-1 - 2023/06/06 (火) 15:32:16 - tama 接着性細胞をセルバンカーに懸濁してクライオチューブに移し，バイセルを用いて-80℃で凍結させたところ，天地が逆になったのか，蓋側に細胞が偏ったまま凍結されてしまいました． （同じタイミングでクライオチューブを2本凍結させましたが，1本のみ上記の状態になりました．） 皆さんはこのような状態のクライオチューブ（凍結細胞）について，次回融解して使用しますか？それとも潔く廃棄しますか？ 使用するとしたら，ウォーターバスで融解する際にコンタミしないよう，パラフィルムを蓋に巻いたうえで融解しようかと考えています． ご意見をいただけますと幸いです．よろしくお願いいたします．

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