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タンパク質発現大腸菌のプラスミドをシークエンスする トピック削除
No.11419-TOPIC - 2023/04/30 (日) 13:43:52 - EDDCC
タンパク質を回収するために、発現ベクターを作製しています。

ライゲーション後、直接BL21等の大腸菌に形質転換して、コロニーピックアップして、シークエンスを読むことは可能なのでしょうか。
あるいは、DH5aを介するべきでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.11419-3 - 2023/05/01 (月) 13:04:41 - asan

可能ですが、通常BL21などはタンパク質発現誘導などの目的で使用されることを前提に遺伝子改変されており、recA遺伝子などが残ったままのものであることが多く大腸菌内でプラスミドに変異が入る可能性が上がります。

通常のクローニングに用いるものは増殖効率含めてそうした部分も改良されてるものですから目的にあった大腸菌を使ったほうがベターです。

https://www.nippongene.com/siyaku/product/e-coli/ecos-sonic/ecos-sonic-competent-e-coli.html

↑こういう特殊なのはあるみたいですが。

(無題) 削除/引用
No.11419-2 - 2023/04/30 (日) 20:10:26 - おお
出来なくはないのだけどBL21は、通常つかうプラスミド構築用の株ほどコンピテンシーが高くないので場合によってはうまく目的のプラスミドが取れない可能性もあるでしょう。そうすると2度でまになってしまうかもしれない。それともBL21と、プラスミド構築用と両方でやってBL 21で取れたらラッキーみたいな感じでやる?

タンパク質発現大腸菌のプラスミドをシークエンスする 削除/引用
No.11419-1 - 2023/04/30 (日) 13:43:52 - EDDCC
タンパク質を回収するために、発現ベクターを作製しています。

ライゲーション後、直接BL21等の大腸菌に形質転換して、コロニーピックアップして、シークエンスを読むことは可能なのでしょうか。
あるいは、DH5aを介するべきでしょうか。

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