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(無題) 削除/引用 No.11415-3 - 2023/04/29 (土) 21:12:23 - 2ME 塩が残っているか？ならばエタノール沈殿（イソプロパノール沈殿？）後の70%エタノールによるリンスをしっかりすること。 レジンのカスか？ならば、DNAをTEに溶解後に遠心してレジンカスを落として上清（DNA溶液）を回収すること。 midi-prepの適切な量を超えた大腸菌量を使っているか？ならば出発材料の大腸菌量を減らすこと。

(無題) 削除/引用 No.11415-2 - 2023/04/29 (土) 16:53:54 - おお MIDI prep がどんな方法(キットなど)を使っているかわかりませんが、、、 本当に4度保存大腸菌に特異的なのかわかりませんが、1mlから取れる大腸菌量とコロニーからピックアップした大腸菌量ではこうしゃのほうが少なくて、Midiで回収する時点で菌体数などで差がついている分不純物の持ち込みが増えたのかもしれません。 クロロフォルムなど使える環境ならクロロフォルム処理、エタチンでリカバーすれば綺麗になりそうです。それが無理なら同量の尿素飽和水を加えて、酢酸ナトリウムなどでエタチンすると思うわたしなら。

midi-prep後のプラスミドが曇る 削除/引用 No.11415-1 - 2023/04/29 (土) 12:03:15 - midi 教えてください。 プラスミド構築後にシークエンスを外注していますが、金曜に提出すると月曜か火曜に結果が返ってきます。 それまで1 mlの大腸菌懸濁液は４度で保存しています。 配列結果が正しければ、その４度の大腸菌を一度遠心し、上清を捨て、フレッシュなLBとアンピシリンを加えて100 mlで振ります。それをmidi-prepすると10回中1,2回くらいの頻度でエタチン後のTE溶解時に曇ったような濁りができます。 こういう場合、mini-prep産物をあらためて形質転換し直して、コロニーピック、mini-cultureそしてそのまま休まず100 mlでmidi cultureすると、透明なプラスミド溶液が作れます。 この曇りはなんなのでしょうか？ 一応、電気泳動したり、nano dropで測定するとバンドはきちんと濃度通り見えるし、濃度も測れてはいます。ただしOD260/280は1.8くらいです。 原因を教えていただけると幸いです。

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